Как определить пол у черепах красноухих черепах: Как определить пол красноухих черепах?

Содержание

Как определить пол красноухих черепах?

Есть мнение, что пол красноухой черепахи можно определить после 4-5-летнего возраста. Именно тогда на половую принадлежность указывают несколько признаков и ошибиться почти невозможно. Однако так долго ждать необязательно. Обычно половые различия заметны уже после 5-6 месяцев, возможно, и раньше. Главная подсказка — углубление в пластроне, которое появляется у самцов. Какие еще есть признаки?

Самки обычно крупнее самцов. Но этот способ определения пола актуален, если у вас несколько разнополых особей. Если черепаха одна — вам не с кем будет сравнивать.

Красная полоска.

Здесь тоже действует принцип сравнения. Если у одной черепахи полоска на голове более яркая и чёткая, а у другой — тусклая, значит, первый самец.

У обоих полов когти на задних лапах будут одинаково короткими. А по передним лапкам пол определяется так: у самки — короткие, у самца — длинные, чтобы при спаривании удобно цепляться за панцирь самки.

Но учитывайте, что это не совсем достоверный способ. У молодняка когти не до конца сформированы, а у зрелых особей они могут быть сточены о жёсткий грунт аквариума.

Строение панциря.

Это более надёжный способ отличить самку красноухой черепахи от самца. Для этого черепашку нужно перевернуть и посмотреть на её, так называемый, живот (пластрон). У самцов он будет вогнут посередине, а у самок нет. Это нужно для того, чтобы самцам было проще взбираться на своих дам при спаривании.

Форма самого панциря тоже различается. Так, у самца в хвостовой части он заострён и как бы образует букву «V». Самочки в этой зоне круглые, а ещё у них есть отверстие для откладывания яиц.

У самца хвост длинный и широкий, с утолщением у основания, потому что в нём прячется половой орган рептилии. У самки хвостик будет короткий и тонкий.

На хвостике расположена клоака, которая у самок находится ближе к панцирю и похожа звёздочку. У самца красноухой черепахи она продолговатая и находится ближе к кончику хвоста.

Опираться только на этот признак не стоит, только в совокупности с другими. У самца морда обычно вытянутая и более острая. У самок — широкая и округлая.

По тому, как ведёт себя черепаха, тоже можно предположить её пол. Самцы более активные. Они любят плавать, чаще выползают на сушу погреться, потом снова плюхаются в воду. Самки могут долго либо плавать, либо греться.

Ещё самцы более агрессивные и могут укусить. Самочка же укусит только при острой необходимости.

Во время брачного периоды поведения разнополых черепах заметно отличаются. Особенно стоит обратить внимание на самца. Он становится ещё активнее, начинает смешно кивать головой и щекотать своими длинными когтями щёки барышни. А ещё самец может подойти особи женского пола и начать кусать ту за шею.

Анализ у ветеринарного врача.

Это, пожалуй, самый точный способ узнать пол красноухой черепахи. Но до 7 лет применять его бесполезно: у самца не сформировались семенники, а самок — яичники.

Как только черепаха достигает половозрелости, можно определить её точный пол. Самца определяют по анализу крови, а самок — по УЗИ.

Зачем знать пол красноухой черепахи?

На то есть несколько причин.

Выбор имени. Чтобы элементарно наделить своего питомца кличкой, хозяину нужно знать пол черепахи. Всё-таки для человека важно знать, с кем они имеют дело — с девочкой или мальчиком.
Содержание нескольких особей. Если несколько самок вполне себе могут поладить, то самцы точно будут устраивать разборки за территорию, а это травмоопасно.
Разведение. Если вы не хотите заниматься разведением, тогда покупайте двух и более черепах женского пола. В противном случае вам понадобятся две разнополые особи.

О целесообразности разведения поговорим далее.

А стоит ли разводить красноухих черепах?

Если неопытный человек решил заняться разведением красноухих черепах в домашних условиях, он может столкнуться с несколькими сложностями. Для этого понадобится и специальный инкубатор, и знания, как им пользоваться.Также нужно помочь паре черепах в период спаривания. Например, поддерживать для них оптимальную температуру, отсадить от других черепах в отдельный террариум, увеличить интенсивность освещения.

В природе самка откладывает яйца в мокрый песок, поэтому для этой цели в террариуме нужно расположить ёмкость с песком или торфом. Если не будет специально отведённого места, мама отложит яйца где придётся — на островке суши или в воде. После этого самка никак не будет заботиться о яйцах, поэтому придётся вам роль матери взять на себя.

Очень важно поддерживать оптимальную температуру в инкубаторе (25-30°С). Причём вы сами можете повлиять на то, какого пола будут малыши. Если хотите только самцов, тогда устанавливайте температуру в 27°С, а если самок — 30°С.

В инкубаторе яйца должны находиться от 3 до 5 месяцев, потом из них начинают вылупляться черепашки. Их придётся поместить отдельно от остальных черепах, потому что те будут наносить малышам увечья. Через 1-1,5 года юных черепашек можно знакомить со «старичками».

Помните, что разведение любых животных — это сложный и ответственный процесс. Если что-то пойдёт не так, и взрослой особи или детёнышу понадобится помощь, вы должны вовремя и правильно её оказать. Без специальных знаний и должного опыта это сделать невозможно.

Как определить пол сухопутной черепахи. Как определить пол красноухой черепахи? Как узнать возраст красноухой черепахи

Как правило, владельцы домашних питомцев хотят знать о них всё. Возраст, особенности характера, и прочие важные мелочи. Всё это помогает сориентироваться, как правильно ухаживать за созданием, которое поселилось в твоём доме (узнайте все подробности содержания черепах в домашних условиях). Что же, сегодня мы решили рассказать вам наши читатели о том,

как научиться определять возраст черепах, и почему это так важно.

Как растут черепахи

Все создания на свет появляются беззащитными, однако, по мере их роста, у одних появляются зубы, у других — когти, а у третьих – растёт панцирь. Как вы догадались, последнее относится к черепахам, у которых по мере их роста увеличиваются размеры панциря, происходит метаморфоза его цвета, а также, меняется форма тела. Так, к примеру,

панцирь темнеет и вытягивается в длину, а когда черепаха-самец достигает периода половой зрелости (важный аспект, если вы хотите заниматься ), то у него на пластроне появляется углубление, становятся более длинными когти, более толстым и длинным хвост, меняется цвет носа и глаз.

В случае, когда процессы роста черепах происходят достаточно интенсивно, то новые роговые слои на периферии их щитков становятся светлого цвета, и потом туда врастают отростки пигментированных клеток, по которым переносится пигмент – как правило, в виде темных пятен или тонких лучей. Но, со временем эти годичные кольца стареют, и пигментированные зоны перестают отличаться от более ранних – такое часто происходит с черепахами, которые содержатся в домашних условиях в неволе.

Именно размеры тела могут многое рассказать нам о возрасте черепахи . Поэтому, ниже мы приведём вам информацию, касательно того, какие параметры бывают у черепах в зависимости от их возраста.

Соотношение размеров тела черепахи и её возраста

Если длина новорожденного самца составляет 2,5-3 сантиметра, то к 1 году длина его тела достигает 5-7 сантиметров, к 2-м годам — 7-9 сантиметров, к 3-м годам – 8-12 сантиметров, к 4-м годам – 10-14 сантиметров, к 5-ти годам – 13 сантиметров.

Если длина тела новорожденной самки составляет 2,5 – 3 сантиметров, то к 1 году она достигает 5-7 сантиметров, к 2–м годам – 7-9 сантиметров, к 3-м годам – 9-15 сантиметров, к 4-м годам – 13-18 сантиметров, к 5-ти годам – 17 сантиметров.

На размеры тела могут влиять условия содержания черепах, их рацион питания (узнайте, ), а также, особенности вида, к которому она принадлежит, однако, опираясь на эти средние параметры, вы можете вычислить приблизительный возраст своей черепахи по длине её тела.

Как определить возраст черепахи по числу колец на её панцире

Ещё одним достаточно информативным способом определения возраста черепахи, является способ его определения по числу колец на панцире вашего питомца. Если учитывать, что в течение 1 года на панцире образуется 2-3 кольца, вы можете подсчитать общее количество колец и вычислить среднее значение количества лет. Однако, если вы будете высчитывать возраст черепахи согласно этого метода, вам стоит принимать во внимание тот факт, что размер и число колец может зависеть от условий содержания черепахи, и также от того, впадала ли она в спячку. Как правило, первые кольца на панцире у черепахи появляются, когда ей ещё нет 1 года. С этого момента можно начинать приблизительный отчёт времени. Но, мы бы также хотели обратить ваше внимание на то, что у старых черепах панцирь становится гладким, а кольца – бледными, и подсчитать их может быть достаточно трудно… Также, если вы будете считать возраст черепахи, опираясь на количество колец на её панцире, мы бы рекомендовали вам не забывать о периодах активного роста: первый период – от новорожденной, до 2-х летки — борозды определяют срок развития от 4-х месяцев и до 6-ти месяцев, а в дальнейшем принято опираться уже на окологодичный цикл.

существуют специалисты, которые по количеству колец на панцире черепах могут рассказать не только всё о её возрасте, но и об условиях содержания и даже перенесенных заболеваниях. Так что, внимательнее присмотритесь к панцирю своего питомца – он скрывает целую биографию…

Вопросом, как определить пол красноухой черепахи, задаются многие заводчики этой популярной домашней рептилии. Ответить на него не так уж легко, ведь для точного определения пола черепашка должна достигнуть определенного возраста и размера. На половую принадлежность красноухих черепах указывает целый ряд признаков.

Определить пол красноухой черепахи можно на основе сравнительного анализа совокупности внешних признаков. Наиболее точные выводы можно сделать, если черепашка уже достигла половой зрелости. Готовыми к размножению считаются рептилии 6-8 лет, средняя длина панциря которых составляет 11 см. Однако и у полутора- или 2-хлетних особей уже можно попытаться определить пол . Итак, если вы хотите получить потомство от своих питомцев или просто гадаете над тем, какие имена им дать, пришло время узнать, как определить пол красноухой черепахи.

Длина когтей

Природа наделила самцов красноухой черепахи более длинными по сравнению с самочками когтями на передних лапах. Длинные и крепкие когти нужны мальчикам-черепашкам для исполнения завлекающего брачного танца в период спаривания и для более прочной фиксации на панцире самки вовремя процесса ее оплодотворения. Когти самок более короткие и тупые.

Определить пол довольно просто, однако этот признак может стать менее явным при содержании рептилий в неволе. Дело в том, что проводящие большую часть времени на суше черепашки просто-напросто стачивают свои коготки, особенно, если структура настила в террариуме тому способствует.

Особенности панциря

Определить пол красноухой черепахи можно, внимательно рассмотрев особенности ее панциря. Для того чтобы опять-таки облегчить черепашкам процесс спаривания, природа наградила самцов панцирем с вогнутой брюшной стороной . У самок такая брюшная вогнутость отсутствует.

Форма панциря также может помочь определить пол красноухой черепахи — у самцов она более вытянутая и удлиненная. Со стороны хвоста панцирь самцов немного заострен и образует латинскую букву V, у самочек брюшная сторона панциря имеет округлую форму и образует большее отверстие, чем у самцов (эта особенность предусмотрена природой для облегчения откладывания яиц).

Хвост и клоака

Скрывающий в себе половой орган хвост самцов красноухой черепахи более широкий у основания и имеет большую по сравнению с хвостом самки длину. У самок хвост гораздо меньше и тоньше.

Определить пол красноухой черепахи можно, внимательно рассмотрев расположение и форму клоаки. У самочек клоака по форме напоминает звездочку и располагается у края панциря. У самцов клоака находится на некотором расстоянии от края панциря и имеет форму прямой линии.

Другие внешние признаки

Определяя пол красноухих черепах одного и того же возраста, сравните их размеры . Самочки, которым природой отведена роль вынашивания и откладывания яиц, несколько крупнее самцов.

Специалисты утверждают, что мордочка самцов красноухой черепахи более острая по сравнению с самками.

Шпоры на лапах самцов гораздо более выраженные.

Особенности поведения

В брачный период самцы красноухой черпахи ведут себя очень активно : они устраивают перед самками показательные выступления, размахивая когтистыми передними лапками, преследуют своих избранниц, кивают им головой.

Итак, теперь вы вооружены необходимыми для определения пола красноухой черепахи сведениями — можно приступать к формированию черепашьих пар и дальнейшему разведению этих милых питомцев. Желаем удачи!

У многих любителей животных возникают проблемы при необходимости определить гендерную принадлежность домашнего питомца, но если различия в строении первичных половых признаков у кошек и собак всем нам более-менее понятны, то задача выяснить, самцом или самкой является красноухая черепаха может поставить в тупик кого угодно.

К счастью, в действительности всё не так сложно, как кажется.

Как узнать пол красноухой черепахи: основные методы

Чтобы не позволить сбить себя с толку, сразу уточним: пол у красноухой черепахи человек, не являющийся герпетологом (так называются специалисты, изучающие рептилий), может определить только после того, как пресмыкающееся достигнет «брачного возраста».

Именно по этой причине во всех источниках отмечается, что определять пол красноухой черепахи можно начиная с возраста 5–7 лет (до этого периода все особи выглядят как самки).

Важно! Красноухая черепаха живёт около 30 лет, при этом половой зрелости рептилия достигает в промежутке 6–8 лет. При содержании в домашних условиях этот возраст немного сдвигается: мальчики становятся взрослыми к 4, девочки — к 5–6 годам.

Существует несколько признаков, позволяющих отличить особь мужского пола от женской, но чтобы «экспертиза» была максимально достоверной, следует использовать их все, и только сравнивая исследование каждого параметра, делать общий вывод.

Длина когтей

Когти, как это ни странно, помогают определить половую принадлежность рептилии лучше, чем все остальные критерии. Достаточно один раз увидеть фото или видео «пальчиков» передних лап мужской и женской особи красноухой черепахи, чтобы оценить и запомнить их принципиальные отличия.
Длина когтей у самцов больше, чем у самок, причём существенно. К моменту достижения половой зрелости такое серьёзное орудие просто необходимо «кавалеру», иначе он не сможет удержаться на скользком панцире «дамы» в самый ответственный момент полового акта, и процесс оплодотворения не произойдёт.

Девочкам подобные «аксессуары» ни к чему, поэтому их коготки коротенькие и тупые.

Правда, есть одна проблема. Черепашки-самцы, содержащиеся в неволе, иногда стачивают свои длинные и острые когти о слишком шероховатые камешки в акватеррариуме, поэтому, внимательно осмотрев лапки рептилии, переходим к изучению следующих параметров.

Панцирь

Ещё одной довольно информативной частью тела у черепахи, с точки зрения идентификации её пола, является панцирь, а если быть более точными — его брюшная часть (она называется пластрон), поскольку именно под ней, в районе хвоста, находятся половые органы рептилии, обуславливающие различия в строении защитного каркаса.
В нижней пластине панциря рептилии заложены сразу четыре подсказки, позволяющие определить пол, а именно:

Нижняя пластина панциря у самцов имеет более узкую, вытянутую форму, у самок пластрон более приплюснутый.
В районе хвоста пластрон у мальчиков заострён, у девочек — закруглён.
На этом же участке (возле хвоста) пластрон у самцов слегка вогнут внутрь, у самок он совершенно плоский. Данное изменение формы позволяет мужской особи зафиксировать осеменитель в половых органах самки в момент полового акта.
Пластрон у самцов всегда имеет синеватый оттенок, у самок он может быть разным.

Знаете ли вы? В 2008 году китайские учёные поставили окончательную точку в долгом научном споре о том, зачем на самом деле черепахе панцирь. Оказывается, эта жёсткая оболочка изначально служила рептилиям вовсе не защитой, а… инструментом для копания, при помощи которого, в совокупности с широкими рёбрами и мощными передними лапами, пресмыкающиеся могли легко добираться до воды. В процессе эволюции, однако, панцирь перестал выполнять своё первоначальное назначение, превратившись в отличную броню. Правда, именно этой броне черепаха обязана своей медлительностью, ставшей нарицательной.

Хвост и клоака

Хвост у особей мужского пола заметно толще и длиннее, чем у самок, поскольку именно под ним скрывается половой член. Ещё один важный показатель состоит в том, что дамские хвостики имеют почти одинаковую толщину по всей длине, в то время как у мальчиков хвост у основания намного шире, чем на кончике.
Нужно отметить, что многие заводчики оценивают пол своих питомцев именно по этому признаку, считая его максимально простым.

Важно! Половой член у черепахи иногда можно визуально наблюдать, в частности, в момент испражнения он может вывернуться наружу. Увидев такое однажды, никаких проблем с идентификацией пола данной конкретной особи уже не возникнет.

Клоака (анальное отверстие) у представителей обоих полов красноухой черепахи отличается как по форме, так и по местонахождению.

Так, у мальчиков это отверстие расположено ближе к концу хвоста, примерно в последней его трети, а у девочек — ближе к его основанию, почти у пластрона.

По форме клоака у черепашек-девочек напоминает звезду, у мальчиков — продольную линию.

Кроме того, в области хвоста у самки расположено довольно большое отверстие, предназначенное для откладывания яиц.

Дополнительные параметры

Всё, что было указано выше, условно можно отнести к первичным половым признакам черепах, однако, как и у других животных, для определения гендерной принадлежности существуют также вторичные признаки. Они менее очевидны, однако игнорировать их всё же не стоит.

Размер тела и форма головы

В биологии различия между мужскими и женскими особями одного и того же вида по анатомическим особенностям, не связанным непосредственно со строением половых органов, называется половым диморфизмом. Одним из его основных признаков является такой критерий, как размер.

У красноухих черепах самки обычно крупнее самцов. Эта особенность объясняется тем, что женские особи должны вынашивать и откладывать яйца, однако нужно отметить, что у многих других представителей этого отряда ситуация является обратной.
Нужно понимать, что, во-первых, размер — понятие относительное, во-вторых, на него влияет не только пол, но также возраст черепашки и условия её содержания.

Знаете ли вы? В природе самцы обычно крупнее (больше и тяжелее), чем самки, у млекопитающих, птиц, ящериц. У рыб половой диморфизм выражается по-разному в зависимости от вида, а вот у земноводных, членистоногих, змей и черепах более внушительные размеры имеют самки. Однако целый ряд черепах, в частности, галапагосские, южноафриканские клювогрудые, пустынные, коробчатые, болотные, каймановы, жёлтые иловые — характеризуются более крупными самцами и мелкими самками.

В целом, данный признак нельзя считать особо достоверным и удобным с практической точки зрения: невозможно определить пол по размеру одной-единственной рептилии (необходимо видеть хотя бы пару, чтобы было с чем сравнивать), кроме того, рассматривая несколько особей, нужно быть абсолютно уверенным в том, что они являются ровесниками и жили в одних и тех же условиях.

Интересно, что, имея более мелкие размеры, самцы красноухих черепах, как и положено представителям сильного пола, выглядят сильнее и крепче своих подруг. В частности, их лапы украшены внушительными бедренными шпорами.
Опытные заводчики умеют различать черепашек также по форме мордочки. Здесь соблюдается то же правило, которое упоминалось при описании хвоста рептилий: у самца морда более вытянутая, у самок — закруглённая.

Важно! Устанавливая пол рептилии, нужно учитывать тот факт, что неправильное содержание красноухой черепахи может вызвать гормональное расстройство у животного, в результате чего многие половые различия (кроме первичных, разумеется) могут быть стёрты или «перекручены».

Для самопроверки можно выделить ещё несколько признаков полового диморфизма у красноухих черепах:

задние лапы: у самцов на них можно наблюдать мелкие чешуйки, у самок эта отличительная черта отсутствует;
нос: у мальчиков он мельче и более заострён;
голова: продольная полоса сбоку у самцов имеет более яркий красный цвет, особенно хорошо это видно в брачный период;
верхняя челюсть: у девочек она зелёная, у мальчиков — белёсая.

Поведение

Различия в поведении черепашек разных полов можно наблюдать исключительно в брачный период и при наличии в непосредственной близости пары, перед которой такое поведение можно демонстрировать. По этой причине данный критерий нельзя назвать удобным, и всё же о нём следует знать.

Как и положено самцам, черепашки-мальчики под воздействием инстинкта размножения начинают всячески демонстрировать своим дамам собственную неотразимость. Они размахивают лапками с расставленными когтями, совершают многозначительные движения головой, активно преследуют самок, пытаясь ухватить их за шею.

Самки наблюдают за стараниями своих кавалеров, сохраняя невозмутимость.

Люди, имеющие богатый опыт в разведении красноухих черепах, отмечают, что в отсутствии поблизости потенциальной «дамы сердца» представители мужского пола намного более активны и любопытны.
Именно для них характерно более быстрое передвижение по акватеррариуму, увлечённое изучение территории, опробование на зуб новых предметов и вообще проявление исследовательских способностей.

Однако начинающим заводчикам черепах, имеющим в своём расположении только одну красноухую особь, на подобный критерий ориентироваться не стоит. Подводя итог, отметим, что существует множество более или менее очевидных признаков, позволяющих отличить черепашку-мальчика от девочки.

Несмотря на то что каждый из них на первых порах наверняка будет вызывать ощутимые сложности, сопоставляя результаты исследования всех признаков в совокупности, даже не имеющий опыта любитель даст правильный ответ на вопрос, кем является объект его наблюдения, — самцом или самкой.

Красноухие черепашки – удивительные и забавные существа, которые сегодня встречаются не только в естественной среде, но и во многих домашних аквариумах. Популярность этих питомцев со временем только возрастает. Они милы, дерзки, подвижны, не прочь поскандалить с сородичами и состроить уморительную мину. Конечно, рептилии отличаются от более распространенных домашних любимцев – кошечек-собачек-попугайчиков, они требуют особых условий содержания и питания. Кроме того, вызывают массу вопросов у владельцев-новичков, например, не всегда понятно, почему они ведут себя так или иначе, и даже половое различие особей нередко остается под вопросом. Как определить пол у красноухих черепах, на что обратить внимание?

К сожалению, не так-то просто отличить самца красноушки от самки, и даже специалист не сможет среди молодняка выбрать малышей нужного пола. Более-менее явные признаки проявляются лишь во время полового созревания особей.

Размножаться красноушки могут с 6-8-летнего возраста, именно в этот период половые различия максимально заметны. Но косвенные признаки присутствуют и у 1,5-2 летних черепашек, и если сопоставить их все, то можно выяснить пол своего питомца.

Владельцу, которого терзает вопрос пола рептилии, обитающей в его аквариуме, стоит обратить внимание на ряд физиологических особенностей этих пресмыкающихся.

Длина когтей

У самцов данной породы, впрочем, как и у большинства представителей других разновидностей черепах, передние конечности снабжены удлиненными когтями. Они есть и у самочек, но их длина значительно скромнее, и нет заострений на концах. Самец их использует во время спаривания, удерживая ими самку, исключая вероятность сползания.

Существует один нюанс – при обитании в искусственном резервуаре черепашка может сточить свои когти об островок суши. В этом случае все зависит от материала, из которого выполнен этот участок.

Особенности карапакса

При определении пола рептилии также можно повнимательнее рассмотреть броню, в которую упаковано ее туловище. Чтобы процесс оплодотворения проходил наиболее удачно, у самцов поверхность пластрона – брюшного щита, имеет небольшую вогнутость. У самочек же этого признака нет.

Также различия имеются и в форме карапакса – у самцов он более овальный, вытянутый, в области хвоста напоминает заостренную галочку. У самок же часть панциря у хвостика округлой формы, здесь же можно увидеть отверстие приличного размера, необходимое для беспроблемной откладки яиц.

Состояние хвоста и клоаки

Так как мужской половой орган черепах находится в хвосте, эта часть у самцов более широкая и длинная, чем у самок. О половой принадлежности особей также сигнализируют расположение и форма клоаки. У самок она напоминает многоугольник типа звездочки и находится близко к панцирю. У самцов клоака расположена чуть дальше от карапакса, и ее форма вполне обычная, напоминает прямую линию.

Прочие половые признаки

Если в одном резервуаре обитают черепашки одного возраста, то стоит попробовать выяснить половую принадлежность рептилий, исходя из их габаритов. Самочки являются более крупными особями – природа позаботилась, чтобы они могли вынашивать потомство и делать полноценную кладку.

Опытные заводчики или зоологи способны различить мальчиков-девочек по мордочке – у самца она более вытянутая, а у самки – притупленная, с плавными, округлыми линиями. Естественно, что речь идет о косвенном признаке, который несведущий человек вряд ли сможет заметить. На конечностях самцов можно обнаружить заметные шпоры на бедрах, что говорит об их крепости и устойчивости, если сравнивать с лапками самочек.

Поведенческие особенности

У большинства животных характер во время брачных игр изменяется, и красноухие черепахи – не исключение. По некоторым повадкам можно понять, к какому полу относится та или иная особь. Прежде всего, в это время самцы оживляются, становятся более активными и подвижными. А как же иначе? Ведь первостепенная задача – привлечь внимание самки, готовой к спариванию. Для этого они устраивают настоящие выступления с демонстрацией собственных возможностей и преимуществ.

Если особь начинает размахивать перед другой черепашкой передними лапками с длинными, большими когтями, то сомнений не должно оставаться – это самец. Кроме того, кавалеры в это время становятся невероятно навязчивы и буквально не дают «невестам» прохода, при этом совершая завлекающие, игривые движения головой.

Видео как определить пол у красноухих черепах

Зачем знать пол рептилии

При разведении этих одомашненных рептилий знание пола особей необходимо, ведь, если упустить этот момент, можно и не получить устойчивые пары красноушек, готовые давать потомство. Черепашки начинают выбирать партнера задолго до того, как достигают половой зрелости. И если поместить в резервуар маленьких разнополых особей, можно ожидать впоследствии появление маленьких черепашат.

Еще один нюанс – красноухие черепахи-самцы довольно агрессивны к своим собратьям и могут наносить оппонентам серьезные увечья. Причины такого поведения связаны с их территориальностью, и даже вне брачного периода они недружелюбны. Кроме того, любой питомец должен иметь свою кличку, и красноушки тоже. А как назвать рептилию без определенного пола?

Экзотика не перестает привлекать людей и заставляет принимать невероятные решения – заводить змей, удавов, крокодилов, аллигаторов и другую невероятную, а порой и опасную живность. Среди подобных обитателей красноухая черепаха смотрится более чем скромно, и может показаться, что она весьма неприхотлива и живуча. Но красноушки все же являются рептилиями со всеми вытекающими последствиями.

Владельцу необходимо обеспечивать питомца подходящими условиями и перед приобретением познакомиться с породными особенностями. В противном случае будет сложно понимать, что нравится, а что нет этой черепашке, и является ли она мальчиком или девочкой.

Чтобы получить детенышей от домашней любимой рептилии необходимо точно знать какого пола Ваш питомец, а следовательно нужно понимать как определить пол черепахи. Однако из-за того, что особи не обладают ярко выраженными половыми признаками, отличить женскую особь от мужской довольно трудно. Следовательно, владельцу этой экзотической рептилии, придется приложить некоторые усилия и понаблюдать за питомцем. Следует уделить внимание именно повадкам черепахи в обществе других особей, а также изучить внешний вид домашней рептилии.

Общие правила различения пола черепах

Определить пол маленьких черепах (возрастом до одного года) не возможно, поэтому если вы во время покупки хотите понять кто перед вами самец, или самка, вряд ли вам сразу это удастся, поскольку для этого необходима только взрослая рептилия. Большинство видов черепах можно различить ближе к половому созреванию. В том случае, если у вас дома обитает один представитель, вам необходимо будет ориентироваться на общие отличительные признаки полов. А вот если вы являетесь счастливым обладателем нескольких особей, или у вас есть возможность одолжить у друзей, их питомца для сравнения, то вы сможете определить пол домашней черепахи, проведя некие наблюдения за поведением особей.

Отличие полов у черепах по внешнему виду

Чтобы понять, как определить пол сухопутных черепах, необходимо узнать об анатомии особей, в частности их особенности.

Пластрон и панцирь черепахи

Если поддать сравнению панцирь обоих полов черепах, то можно обнаружить, что у самочек он не такой продолговатый как у самцов. При этом такая часть тела, как пластрон (расположен со стороны брюха), имеет гораздо больше характерных отличий. Если перевернуть питомца, то сразу можно рассмотреть все его особенности. У представительниц женского пола, брюшная часть панциря плоская, в то время как у самцов он немного вогнут во внутрь. Такие сравнения полов можно производит только со зрелыми особями, которые стали способными давать потомства, и выросли до 11 см. не меньше. Следует также знать, что самочки крупнее самцов.

Когти, клоака и хвост черепахи

Помочь с ответом на вопрос, как определить пол домашней черепахи, может также хвост рептилии. У мужских представителей хвост длиннее и шире, нежели у самок, при этом его форма также отличается. Мужские особи обладают хвостом, немного опущенным к земле, а хвост самок прямой и короткий.

У женских представительниц черепашьего мира анальное отверстие имеет форму звезды и располагается ближе к концу панциря, в то время как у самцов клоака имеет вид прямой линии.

Когти это еще одна характерная черта, с помощью которой можно определить пол черепахи. Передние лапы самцов имеют когти, длина которых значительно превосходит длину когтей женских особей, при этом исключением являются пантеровые черепахи, у которых эта особенность имеет обратный вид. Самцы коробчатых черепах имеет утолщенные когти на передних конечностях, а вот на задних они загнуты вниз.

Голова рептилии

Глаза Каролинской коробчатой черепахи, в частности у самца, имеют оболочку красноватого оттенка. А вот такой вид, как самка болотной черепахи, обладают желтоватыми глазами, в то время как «мальчики» имеют коричневый цвет глаз.

Еще одной характерной особенностью для черепах-девочек является развитие челюсти на большем уровне, нежели у самцов. Красноухие черепахи, а именно самцы, имеют более длинный нос, а вот у самок нет такой выраженной особенности.

Определение пола черепахи по поведению

Чтобы определить пол своей любимой домашней черепахи, нужно некоторое время понаблюдать за поведением питомца в обществе себе подобных. Мужские особи более активны и могут проявлять агрессию, в особенности во время брачного периода, а вот для самок более характерно прятать свою голову в панцирь.

Во время брачного периода мужские особи очень активно ухаживают за самками и своеобразно трясут перед ними головой, а вот по отношению других представителей мужского пола, они очень часто проявляют агрессию.

А о том, и как определить возраст домашней черепахи читайте в этой статье.

Понравилась статья? Забирай себе на стену, поддержи проект!

Как определить пол красноухих черепах. Совет

При покупке красноухих черепах, особенно маленьких и молодых особей, приходится полагаться на то, что продавец в зоомагазине сказал об их поле. Это очень важно, если вы покупаете самца и самку. Но через некоторое время может оказаться, что ваши любимцы — это две самки или два самца. Давайте узнаем, как определить пол красноухих черепах.

Определить пол у черепах довольно легко только тогда, когда они достигают возраста 5-7 лет, т. е. становятся половозрелыми. При этом самцы красноухих черепах становятся половозрелыми к 3-5 годам, тогда как самки — к 5-7. В более раннем возрасте, когда вам продают маленькую черепашку, сказать что-то конкретное о поле очень сложно. Также достоверно что-то сказать о поле можно только после того, как размер панциря черепахи достигнет 7-10 см.

Опытные заводики черепах знают, что определять пол любой особи лучше в сравнении с другими. Так намного легче удостовериться в догадках, ведь порой что-то может вызвать сомнения или же показаться непонятным.

А теперь давайте посмотрим, как отличить красноухих черепах. Для всех черепах есть одно общее половое отличие: расположение клоаки на хвосте. У самок клоака находится у основания хвоста и имеет форму звездочки. У самцов же клоака находится ближе к концу хвоста и похожа на вытянутую линию.

Помимо этого главного признака пол красноухой черепахи можно определить, посмотрев на ее внешний вид. Самки и самцы немного отличаются друг от друга, но неопытный заводчик не сможет понять, в чем именно.

Вернемся к хвосту. У самца хвост длиннее и тоньше, чем у самки, да и имеет утолщение у основания. Хвост самки немного короче и толще.

Определить пол красноухой черепахи легче всего по когтям. У самцов когти на передних лапах очень длинные и изогнутые. А вот у самок когти очень короткие. Длинные когти нужны самцу для того, чтобы во время спаривания он мог удерживать панцирь самки.

Еще одна особенность, которая поможет вам понять, кто у вас, красноухая черепаха девочка или мальчик, — это строение панциря. Пока черепашки маленькие, никаких отличий в форме панциря не будет, но когда они подрастают, то разница становится заметной. На пластроне (нижней стороне панциря) у самцов есть небольшое углубление. Оно требуется, чтобы самец с его помощью закреплялся на панцире самки. Самкам такое углубление на пластроне не требуется, поэтому он плоский и гладкий.

Так как самкам черепах предстоит вынашивать и откладывать яйца, то женские особи намного крупнее мужских. Это очень хорошо заметно, если у вас живут и самка, и самец.

Все эти признаки помогут вам определить, кто же именно живет у вас. Возможно, вы ошиблись с именем и уже несколько лет под именем Маша у вас живет Миша. Конечно, черепахе все равно, но вам ведь достоверно хочется знать пол вашего питомца.

А вы знаете, что у самцов очень ярко выражено половое поведение? Уже с возраста одного года (только в условиях содержания в неволе) они начинают активно ухаживать за самками: покусывать их за шею, преследовать и кивать головой. Но особенно хорошо это заметно только в том случае, если в одном аквариуме живет несколько черепах разных полов.

Как определить пол красноухой и сухопутной черепахи? Как определить пол красноухой черепахи Красноухая черепаха различие пола.

Красноухие черепахи — большие индивидуалистки. В аквариумах они любят жить поодиночке. Но конечно же, многие хотели бы содержать у себя в доме все же двух рептилий одновременно — самца и самку. И соответственно, такие любители домашней живности часто задаются в том числе и вопросом о том, как определить пол красноухой черепахи.

Биологические особенности

Живут меньше, чем сухопутные. Однако радовать хозяев своим присутствием они могут все же достаточно долго. В домашних условиях срок их жизни составляет примерно 20-25 лет. Соответственно, и половое созревание у этих рептилий наступает довольно-таки поздно.

Самцы красноушек могут начать обращать внимание на самок в возрасте уже примерно одного года. Но половое созревание у мальчиков-черепах обычно наступает все же только в 3-5 лет. Самочки при этом взрослеют еще позже. Девочки-черепашки созревают примерно в 5-7 лет.

Таким образом, тем, кто интересуется, как определить пол у карсноухих черепах, стоит подождать наступления именно этого возраста своего питомца. С точностью сказать, кто проживает в домашнем аквариуме, можно будет только тогда, когда длина панциря рептилии достигнет примерно 7-10 см.

Как определить пол красноухой черепахи: отличия самцов от самок

Для того чтобы точно узнать, кто именно живет в доме, в первую очередь следует внимательно осмотреть питомца. Отличия у самцов и самок красноухих черепах имеются следующие:

девочки обычно имеют большие размеры, чем мальчики;

когти у самца гораздо длиннее, чем у самки;

хвост у мальчика длиннее, чем у девочки;

у самца на пластроне имеется небольшая выемка.

Большие размеры черепахам-самкам нужны для того, чтобы с легкостью откладывать необходимое для продолжения рода количество яиц. Отращивать же слишком длинные когти красноушкам-девочкам особой нужды нет. Самцу при этом они необходимы для того, чтобы удерживать подружку за панцирь во время спаривания.

Примерно для этой же цели мальчикам-черепахам нужна и выемка на пластроне. При ее наличии самцам проще удерживаться на панцире самки во время любовных игр.

Основной признак

Как определить пол красноухой черепахи по внешнему виду, таким образом, понятно. Но узнать, кто находится перед вами, самец или самка, можно и другим способом — по расположению и форме клоаки рептилии.

У красноухих черепах-девочек этот орган находится ближе к корню хвоста. При этом форму он имеет звездчатую. У самцов клоака расположена ближе к концу хвоста. Формой она при этом отличается удлиненной.

Поведение рептилий

Отличить взрослого самца от самки по внешним признакам, таким образом, будет относительно несложно. Но как определить пол красноухой черепахи по поведению? В данном случае ориентироваться следует в первую очередь на степень агрессивности питомца.

Черепахи-мальчики обычно намного активнее и подвижнее девочек. К примеру, при попытке вытащить взрослого самца из аквариума, он, скорее всего, постарается дотянуться клювом до руки хозяина и укусить. В любом случае вырываться и пытаться сбежать мальчик будет очень активно.

Черепашка-девочка же, вытащенная из аквариума, скорее всего, втянет голову в панцирь и будет просто висеть в руке хозяина, ожидая, когда ее отпустят обратно. Самки красноушек особой активностью и тем более агрессивностью обычно не отличаются.

Как определить пол у красноухой черепахи маленькой

Отличить в зоомагазине взрослого самца от самки, таким образом, несложно. Маленьких же черепашек для содержания в домашних условиях стоит покупать все же поодиночке. Определить пол таких рептилий, к сожалению, практически невозможно. Позже, когда питомец вырастет, и станет понятно, кто он на самом деле — самец или самка, можно будет приобрести ему дополнительно друга или подружку.

При желании, конечно же, можно рискнуть и купить для аквариума сразу двух маленьких особей. В этом случае, чтобы повысить шансы того, что в доме будут проживать разнополые рептилии, в первую очередь стоит обратить внимание на поведение будущих питомцев.

Так как же определить пол маленьких красноухих черепах? Как уже упоминалось, рептилии-мальчики обычно бывают более активными и подвижными, чем девочки. Если черепашка старается убежать от сачка или руки пытающегося выловить ее продавца — возможно, это самец. Если же рептилия затаилась и спрятала голову и лапки под панцирь — существует довольно-таки большая вероятность того, что это девочка.

Какие условия следует создать паре черепашек

Таким образом, мы выяснили, как определить пол и возраст у красноухих черепах. Подобрать для содержания в домашних условиях взрослых самца и самку труда не составит. Но получить потомство от красноушек в неволе, даже в том случае, если в аквариуме проживают гарантированно разнополые особи, будет все-таки довольно проблематично. Яйца такие черепашки откладывают не в воде, а на суше, закапывая в песок.

Но как бы там ни было, условия паре черепах в аквариуме, конечно же, следует создать достойные. Емкость для содержания рептилий в данном случае следует приобрести объемом не менее 150 л. Для каждой черепашки при этом нужно предусмотреть свой собственный плотик на присосках с подставкой. Над плотиками следует обязательно поставить лампу накаливания для создания комфортной температуры и УФ-светильник.

Если владельцы черепашек все же рассчитывают получить потомство, в аквариум, помимо всего прочего, нужно будет поместить и кюветку с песком или торфом. Устанавливать такую емкость следует так, чтобы самка без труда могла в нее залезть. Отложенные яйца красноушек в дальнейшем допускается инкубировать в обычном курином аппарате при температуре в 22-30 °С.

Аквариумные черепахи уже давно перестали быть экзотикой даже в наших, казалось бы, совершенно не предназначенных для их обитания краях. Однако большей популярностью среди российских аквариумистов пользуется именно красноухая черепаха. Объясняется распространенность этого вида довольно просто: красноухие черепахи привлекательны внешне, неприхотливы в уходе и очень умны.

При этом многие владельцы таких черепашек отмечают, что увлекательнее всего наблюдать за террариумом, в котором содержатся сразу несколько таких рептилий. Более опытные любители приобретают красноухих черепах с целью их дальнейшего разведения. Зачастую владельцы этих рептилий задаются вопросом о том, как определить пол красноухих черепах.

Определяем пол красноухих черепах

Определение пола красноухих черепах — дело несложное в том случае, если животное достигло половой зрелости (обычно это происходит на 6-8-ой год жизни). Достаточно лишь посмотреть на когти животного: у самок они значительно короче, чем у самцов. Тогда как различить пол красноухой черепахи, не достигшей половозрелого возраста? Легче всего это будет сделать, сравнив свою черепаху с другими. Для этого отлично подойдет зоомагазин, в котором пресмыкающееся и было приобретено, конечно, при условии, что в террариуме обитает несколько черепах. Чем больше их там будет, тем лучше. Теперь обратимся к следующим признакам, которые помогут ответить на вопрос о том, как определить пол красноухих черепах:

Что делать, если не получается определиться с полом черепахи?

Если же и после тщательного осмотра питомца вы не поняли, как определить пол красноухих черепах, вам остается либо обратиться к специалисту, либо подождать, пока животное подрастет. Совершенно необязательно ждать 6-8 лет, возможно, что ближе к подростковому возрасту внешние половые признаки черепахи станут более выраженными. К слову, половой диморфизм у этого вида черепах ярко выражается и в размерах: самки заметно крупнее и массивнее самцов. Особенно актуальным вопрос о том, как определить пол красноухих черепах, покажется заводчикам таких рептилий. В случае если вы планируете завести только одного питомца, то его половая принадлежность не будет иметь большого значения, так как принципиальных различий в уходе за самцами и самками нет. Однако стоить принять во внимание тот факт, что красноухие черепахи-самцы могут вести себя достаточно агрессивно как по отношению к соседям по террариуму, так и к собственным хозяевам.

Количество источников, использованных в этой статье: . Вы найдете их список внизу страницы.

Если у вас есть черепаха, то вам будет полезно узнать, какого она пола. Тем не менее, в отличие от многих млекопитающих, у черепах (которые, в общем-то, млекопитающими и не являются) нет внешних половых органов. Это делает определение пола более сложным заданием, с которым, впрочем, все еще можно справиться. Вам будет легче определить пол черепахи, если для сравнения вы возьмете двух черепах разного пола. Если у вас есть только одна черепаха, то вам потребуется изучить как можно больше особенностей мужских и женских особей для определения пола.

Посмотрите на панцирь черепахи. Раковины черепах, или панцири, немного отличаются в зависимости от пола. Панцирь у взрослого самца имеет более удлиненную форму по сравнению с панцирем взрослой самки.

При определении пола черепахи этот метод может быть весьма ограничен, потому что вы должны убедиться, что черепаха достигла половой зрелости. Возможно, вы решите, что это самец, но на самом деле окажется так, что черепаха еще не достигла своей половой зрелости.
Между размерами большого самца и небольшой самки возможны различия, из-за этого определить пол может быть невозможно, особенно если у вас одна особь.

Изучите пластрон черепахи. Пластрон — это нижняя (брюшная) часть панциря. Чтобы изучить пластрон, осторожно переверните черепаху пластроном вверх. Они не любят быть перевернутыми и могут попытаться укусить, поэтому держать черепаху следует за края панциря у хвоста, чтобы она не достала до вас. Осторожно переверните черепаху и посмотрите на пластрон. Пластрон у самца слегка вогнут (изгибается внутрь), а у самки он плоский.

Вогнутый пластрон самца черепахи позволяет животному удерживаться на самке во время спаривания.
Плоская форма пластрона самки связана с необходимостью вынашивания яиц.

Проверьте, есть ли выемка у хвоста черепахи. Самец черепахи имеет выемку в задней части панциря в форме буквы V. Выемка для хвоста необходима для спаривания черепах. В противном случае хвост может быть придавлен к пластрону.

Посмотрите на видовые особенности. Некоторые виды черепах имеют характерные половые отличия в окрасе:

Американская коробчатая черепаха: в 90 % случаев радужные оболочки глаз у самцов красные или оранжевые, а у самок — коричневые или желтые. Кроме того, самки имеют более высокий куполообразный панцирь, округленной формы, в то время как самец имеет более сплющенный овальный или продолговатый по форме панцирь.
Расписная черепаха: если пластрон черепахи синего цвета, это самец, а если пластрон другого цвета, отличного от синего, то это самка.

Детальные особенности

Осмотрите когти черепахи. Самцы черепах используют свои когти во время спаривания с самками. Они также используют свои когти, чтобы бороться и защищать свою территорию. Таким образом, когти на передних лапах у самцов, как правило, длиннее, чем у самок. Опять же, это более очевидно, когда для сравнения друг с другом у вас есть две черепахи разного пола.
- У красной болотной водной черепахи имеется ярко выраженная разница между когтями самца и самки.
Посмотрите на клоаку черепахи. У самцов и самок имеется отверстие, расположенное в нижней части хвоста. Оно называется клоакой; его расположение зависит от пола.
- У самки клоака более круглая и имеет форму звезды. Она находится близко к телу, почти под панцирем.
- Клоака у самца длиннее и более крупная. Она располагается в последней трети от хвоста по направлению к его кончику.
- Чтобы определить пол черепахи по этому методу, вы должны знать размер хвоста у самца или у самки. В противном случае этот способ может быть ненадежным.
Объедините несколько признаков, чтобы сделать вывод. Вы сможете достаточно точно определить пол черепахи, если оцените все вышеописанные признаки и проанализируете их в совокупности. Имейте в виду, что для определения пола черепахи некоторые признаки являются менее надежными, чем другие.

Провести анализ клоаки вам помогут рисунки или фотографии. Для этого, к примеру, есть очень удобная и хорошая книга «Черепахи. Содержание, болезни и лечение» Д. Васильева.
Существует много видов морских черепах (в частности, атлантические ридлеи, морские черепахи Кемпа и другие), которые не имеют внешних половых признаков. Поговорите с ветеринаром, специализирующимся на морских животных, чтобы узнать какого пола ваша черепаха.

Предупреждения

источников

Информация о статье

Соавтором этой статьи является Pippa Elliott, MRCVS . (RU) Dr. Elliott is a veterinarian with over thirty years of experience. She graduated from the University of Glasgow in 1987, and worked as a veterinary surgeon for 7 years. Afterward, Dr. Elliott worked as a veterinarian at an animal clinic for over a decade.

Категории:

Как отличить черепаху мальчика от девочки? Такой вопрос возникает по разным причинам. Одним людям нужна информация для того чтобы купить определенную особь в магазине. Другие люди задают такой вопрос, поскольку им нужна информация для разведения рептилий. Но дать точный ответ могут далеко не все люди, ведь основные отличия появляются только с возрастом, когда у рептилий наступает половое созревание. Кроме того, чем больше размеры животного, тем позже может начаться созревание. Но есть определенные рекомендации и правила, по которым можно узнать стать питомца.

Отличия красноухих черепах

Намного проще определить пол – это осмотреть две черепахи одинаковые по возрасту. Красноухая порода – это водные рептилии. Их украшением является пятно в области ушей, у которого красный или желтый цвет. Для определения пола такого животного, потребуется подождать, пока молодняк подрастет до 1 года. После этого можно применить некоторые советы, что позволят узнать, где мальчик, а где девочка:

Размеры рептилий. Если сравнивать пару особей, которые по размерам будут примерно с ладонь, то у самок габариты будут явно больше чем у самцов.
Когти на передних лапах. У мальчиков когти отличаются от девочек своей длинной и размерами. Они больше и мощнее, с их помощью рептилии привлекают партнерш во время брачного периода, а также чешут шею избраннице.
Хвост. Осматривая заднюю часть животного можно заметить, что у самцов хвост плотнее по своей структуре и более длинный.
Поведение. Мальчики всегда агрессивнее, чем самки, поэтому отличить пол можно посмотрев на поведение животных.
У самок расположение анального отверстия близко к карапаксу.
Исходя из того что природа дала самкам возможность делать потомство, путем откладывания яиц, внешне их клоака будет чем то напоминать звездочку. Она больше по размерам, чем у самцов и имеет продольную форму.

Все что потребуется от заводчика или покупателя рептилии – это понаблюдать за поведением особей и провести быстрый и простой осмотр, используя приведенные советы. Только так можно будет узнать какой пол у черепахи.

Отличия сухопутных черепах

Половая особенность у сухопутных видов различается немного иными методами. Поэтому ниже представлен перечень, как различить самку, от самца сухопутных видов рептилий:

Если посмотреть и сравнить заднюю часть рептилий разных полов, а именно их хвост, то можно заметить, что самцы обладают длинным хвостом, которому свойственно загибаться в средину.
Отличить пол можно по форме клоаки. Для этого нужно осмотреть форму и ее размеры, как и в случае с красноухой породой.
Отличие полов можно найти и в пластроне. У девочек нижняя часть их панциря будет полностью плоской, а вот мальчики являются обладателями слегка вогнутой нижней частью.
У сухопутной черепахи самца есть бедренные шпоры, у самок их нет.

Стоит отметить, что есть такие виды черепах, у которых половые различия отличаются от других пород и присущи только им. Поэтому рекомендуется детально ознакомиться изначально с породой и отличиями конкретного вида и только потом делать покупку или начинать разводить особей.

Есть и общие правила по отличию пола у черепах. К ним можно отнести следующие:

У мальчиков панцирь всегда более длинный и имеет овальную, вытянутую форму.
Самки по размерам практически всегда больше самцов в аналогичном возрасте.
У самок зачастую челюсти развиты лучше, чем у самцов.
У девочек красноухой породы голова немного длиннее, чем у противоположного пола.
Лучше всего определить пол молодых особей – смотреть за их поведением, особенно если их в аквариуме двое и более. Самцы будут активнее, чем самки, а еще слабому полу свойственно прятать голову в свой панцирь.

Тем, кто решил заняться разведением черепашек, необходимо знать, по каким признакам можно определить пол животного. Оказывается, это не так просто, как кажется на первый взгляд – внешне мальчики и девочки почти неразличимы, в отличие от других животных. Не менее важно знать, сколько живет эта рептилия в естественной среде и домашних условиях, и для этого, опять же, придется вооружиться некоторой информацией.

Итак, как узнать пол черепашки, и, наконец, дать ей соответствующее имя? К сожалению, для этого придется подождать, когда домашний питомец достигнет половой зрелости, а этот период соответствует 7-8 годам жизни рептилии. При этом ее панцирь должен иметь в длину не меньше десяти сантиметров. Чтобы не ждать так долго, придется прибегнуть к другому способу. Выяснить половую принадлежность можно по ряду отличительных внешних характеристик пресмыкающегося.

Например, по панцирю, вернее, по его брюшному щиту – пластрону:

у самок это, практически, ровная плоскость без каких-либо углублений и вогнутостей, а у некоторых видов щиток и вовсе слегка выпуклый;
самцы имеют, как и полагается мужчинам, более поджарое брюшко – их панцирь отличается вогнутой формой, а на бедрах задних ножек, как правило, присутствуют наросты в виде шпор.

Состояние панциря может подтвердить половую принадлежность рептилии и своими бугорками, которые у девочек выражены наиболее ярко – у самцов они изначально не такие выдающиеся, а с каждым годом все больше сглаживаются, к возрасту полового созревания исчезая совсем.

Коготки животного тоже могут дать представление о том, кто перед вами – мальчик или девочка:

На самом деле, когти на черепашьих лапках рептилий обоих полов значительно отличаются по своей длине и толщине. Роговые пластинки самцов гораздо длиннее и крепче – это обусловлено тем, что во время брачной игры они необходимы им, чтобы крепко цепляться за панцирь самочки.
Девочкам не нужны такие приспособления, поэтому их когти короткие и достаточно тупые.

В домашних условиях по этому признаку бывает сложно определить пол из-за того, что в неволе роговой слой питомцев может стачиваться о грунт террариума или черепашки делают это сами.

Среди других характеристик, способных помочь в выяснении пола – хвост и клоака животного:

У мальчиков хвост более широкий и длинный, спрятанный под панцирем, который в этой зоне сильно загибается вниз. Это связано с тем, что под ним находится половой орган. А вот у дам короткий тонкий хвостик можно обнаружить снаружи.
Клоака пресмыкающегося – тоже предмет для исследования. У самок она смещена к краю панциря и имеет форму маленькой звездочки, в то время как у самца несколько отодвинута от пластрона и представлена в виде продольной полоски.

Если домашним питомцем стала болотная черепашка, достаточно заглянуть в ее глаза – обычно у самок они янтарно-желтые, а у самцов – более темные с карим оттенком.
Оценивать пол животного можно и, сообразуясь с визуальными наблюдениями поведения и размеров животных. Если в один террариум помещено несколько рептилий одного возраста, сразу можно заметить, что одни несколько крупнее других. Самки всегда отличаются более внушительными габаритами, так как их репродуктивной задачей является вынашивание и откладывание яиц.

Различное поведение во время брачного сезона также может выдать в животных представителей разных полов. Самки, как правило, ведут себя довольно сдержанно, чего нельзя сказать о самцах. Чтобы привлечь внимание своей избранницы, мальчик будет весьма активно передвигаться по террариуму, кивать головкой в разные стороны, шевелить хвостом, приподнимаясь, размахивать передними лапками. К своим соперникам половозрелый самец относится агрессивно – может на них нападать, кусаться и наносить удары когтистыми лапками, стараться перевернуть оппонента на спину.

Как определить возраст черепахи

Иногда питомец попадает к нам от неизвестного владельца, и спросить об этом не у кого, а знать о возрасте питомца очень важно.

Один из способов это выяснить, подсчитать возраст арифметически, исходя из того, что каждый год новорожденная рептилия размером в 3 сантиметра и весом 10 г, вырастает на 2 см. Это усредненная норма, принятая для всех представителей сухопутных рептилий средних и небольших размеров. Соответственно, питомец к 10 годам будет иметь длину около 18-20 сантиметров. Но не стоит забывать, что черепахи некоторых видов отличаются более активным ростом самок.

Другой способ заключается в изучении роговых щитков панциря, которые с каждым годом становятся все более жесткими. За первый год формируется до 2-3 светлых слоев, а через пять лет они имеют обыкновение темнеть, после чего такие «кольца» начинают появляться у черепашки ежегодно. Отличить старую черепашку можно по бледному, лишенному яркого рисунка панцирю.

Сколько сухопутная черепаха живет в домашних условиях

Срок жизни сухопутных черепах зависит от внешних и внутренних факторов, в частности от того, в какой среде они обитают, а также от физиологических особенностей организма данного вида животных.

Представители дикой природы живут около 150 лет и чем крупнее особь, тем дольше срок ее жизни, домашние же черепашки способны прожить рядом с человеком не более 50-60 лет, хотя и это не малый срок. Конечно, основную роль в этом играет правильный уход, содержание и питание маленького питомца.

Ученые объясняют такую большую разницу тем, что в естественной среде животное, фактически, постоянно находясь на вынужденной диете, при этом непрерывно двигается в поисках пищи. Это и дает ей определенные преимущества, которых лишены, большей частью, закормленные, в буквальном смысле, до смерти, их домашние собратья. Вот почему ветеринары регулярно напоминают владельцам, что пресмыкающееся не должно переедать.

Возраст сухопутной черепашки совсем не помеха для ее активной, познавательной деятельности, и неважно, что животное не является образцом скорости – жить и радовать своих хозяев эта удивительная рептилия может довольно долго, если хозяин проявит настоящую заботу о своем маленьком необычном питомце.

Как определить пол у сухопутных и красноухих черепах по внешним признакам

Как определить пол черепахи? Вопрос, которым задаётся не только любой начинающий заводчик, но и простой человек, желающий дать подходящее имя своему новому питомцу. Тут сразу нужно отметить тот неутешительный факт, что в самом раннем возрасте узнавать, кто перед вами — мальчик или девочка — сложно. А зачастую невозможно и бесполезно.

Несмотря на то, что пол черепашки формируется в яйце, внешние различия между ними становятся заметными лишь к периоду полового созревания. Да и самки в детстве нередко имитируют брачное поведение своих потенциальных партнёров, сводя на нет все наблюдения.

Но это вовсе не значит, что для однозначного «диагноза» необходимо ждать возраста половозрелости черепахи. От пяти до восьми лет — уж слишком это долго. Определить принадлежность к тому или иному полу можно уже на первом году жизни земноводного. Или даже немного раньше: различия между самками и самцами становятся заметны в период, когда длина их панциря достигает 8−11 сантиметров. В таком случае стоит обратить внимание на:

панцирь;
лапы;
хвост.

Ниже описаны принципиальные отличия.

Как определить пол красноухой черепахи?

Длина и внешний вид когтей, панцирь

Самое очевидное, что почти сразу же бросается в глаза, если в аквариуме присутствует несколько красноухих черепах: их когти. Коготки самок довольно короткие и тупые. Тогда как у самцов, в отличие от них, они длинные. Эта особенность имеет сразу два практических применения. Во-первых, такими когтями гораздо проще цепляться и удерживаться на панцире самки во время спаривания. А во-вторых, красноухие черепахи с их помощью заигрывают со своей второй половинкой, исполняя своеобразные танцы и привлекая к себе внимания. Но есть один нюанс: в неволе когти черепахи могут стачиваться о грубый материал островка суши в аквариуме.

Размеры и форма панциря красноухой черепашки также имеют значение. В первую очередь — это нижняя его половина — у самцов пластрон вогнут внутрь. Да и в целом их панцирь несколько отличается от тех, что «носят» девчонки. Он меньших размеров, более вытянут и имеет овальные очертания. Как и в случае с когтями, данные особенности упрощают черепахам процесс оплодотворения.

Самки, в свою очередь, несколько крупнее и куда более округлых форм, так как им необходимо вынашивать и откладывать яйца. С чем связана другая, менее очевидная отличительная черта пластрона: у самцов в районе хвоста он образует V-образный контур, в то время как у самочек данный край короткий и «оформлен» полукругом.

Хвост и клоака

Чтобы узнать пол в этом случае, нужно также обратить внимание на форму и размеры. Мальчишки отличаются более широким и длинным хвостом, потому как именно в нём находится половой орган. Следовательно, самочки подобных особенностей лишены — их хвостик более короткий и не утолщён у основания.

Нелишним будет взглянуть и на расположение клоаки, которая однозначно идентифицирует пол питомца. У самок она располагается ближе к основанию хвоста и по своему внешнему виду напоминает звёздочку. А вот, клоака мальчиков, напротив, может находиться почти что у самого края хвоста и имеет вид складочки, похожей на поперечную линию.

Как определить пол сухопутной черепахи?

Лапы и панцирь

Многие внешние половые признаки сухопутной черепашки похожи или идентичны с особенностями красноухих. Например, в их случае коготки самцов тоже более длинные, толстые и крепкие, нежели у самочек. И служат аналогичной цели: необходимости удержаться на панцире самки в момент оплодотворения. Но в то же время когти сухопутных черепах гораздо чаще подвергаются стачиванию из-за постоянного пребывания на «суше» террариума. Поэтому полагаться только на данный признак, несмотря на всю его очевидность, не стоит.

Ещё пределить пол взрослой рептилии можно с помощью обычного осмотра панциря.

Помимо очевидного наличия вогнутости пластрона, задние лапы практически всегда «оснащены» мощными шпорами. Которые, как и длинные когти спереди, помогают ему удерживаться на своей партнёрше.

Самка же имеет плоскую или даже выпуклую форму пластрона. Её панцирь более крупный, с отчётливыми бугорками, сглаживающимися с возрастом у самцов. Но есть другая характерная особенность — он сильно загибается в районе хвоста.

Хвост и форма клоаки

Тут аналогично водным черепахам:

Самец — хвост длинный, широкий у основания и быстро сужающийся к концу. При всём этом он практически всегда полностью скрывается под панцирем.
Самка — тонкий и короткий хвост, находящийся снаружи панциря.

Дополнением к этому признаку может стать форма и месторасположение клоаки на хвосте. У самок сухопутной черепахи она, как и у красноухой, имеет очертания звёзды и находится в основании хвоста. У самцов — ближе к середине или даже кончику, по своей форме приближаясь к продольной полоске.

Определение пола у черепах

Для многих видов черепах характерен половой диморфизм, когда самки и самцы внешне отличаются по окрасу, длине хвоста и когтей, размеру и форме панциря.

Самые большие различия в окраске отмечаются у пресноводных (Emydidae) и азиатских болотных (Geomydidae) черепах. У самцов и самок по-разному окрашены голова, радужка глаз, подбородок или отметины на голове. Например, самцы восточных коробчатых черепах (Terrapene carolina carolina) имеют ярко-красную радужную оболочку, в то время как глаза самок лишь слегка красноватого оттенка. Некоторые из этих отличий появляются у самцов только в период размножения. Так, голова самцов расписных черепах (Callagur borneoensis) во время сезона спаривания меняет цвет с серого на белый с яркой красной полосой между глаз.

Большинство самцов водных черепах имеют длинные когти на передних лапах, которые используют, чобы удерживать самок во время спаривания. Эта особенность характерна для украшенных черепах (Trachemys, Pseudemys, Chrysemys и Graptemys). Самцы коробчатых черепах имеют утолщенные загнутые когти на задних лапах со внутренней стороны, которыми помогают себе при спаривании. Половозрелые самки пантеровых черепах (Geochelone pardalis) также имеют удлиненные когти на заних лапах, которые используют при откладке яиц.

Самым очевидным проявлением полового диморфизма является форма и размер панциря. У большинства видов хвост самцов длиннее и толще, клоака расположена дальше от панциря, пластрон (нижняя часть панциря) вогнут, а анальная выемка — уже и глубже, чем у самок. Напротив, хвост самок тоньше и более заострен, клоака расположена ближе к панцирю, пластрон плоский, а анальная выемка шире, чем у самцов. После достижения половой зрелости, эти признаки достаточно легко обнаружить. Кроме того, самцы периодически выворачивают половой член при дефекации или манипуляциях в задней части тела. Длина хвоста чилийских черепах (Geochelone chilensis) одинакова у самцов и самок.

Размер самок и самцов отличается у скрытошейных черепах. В 70% случаев из 50 исследованных видов самки оказывались крупнее. Самцы были крупнее в 22% случаев, остальные 8% — оба пола имели одинаковый размер. Самцы крупнее самок у галапагосских (Geochelone nigra), южноафриканских клювогрудых (Chersina angulata), пустынных, коробчатых (Terrapene carolina) черепах, болотных черепах Мюлленберга (Clemmys muhlenbergii), американской болотной (Emydoidea blandingii), каймановых и желтых иловых (Kinosternon flavescens) черепах.

На главную страницу раздела «Черепахи»

Интересная статья? Поделись ей с другими:

Как определить пол красноухих черепах? :: SYL.ru

Красноухие черепахи — описание и уход

Определяем пол красноухих черепах

Хвост у самцов обычно значительно длиннее, чем у самок, а его основание заметно толще, чем кончик. У самок хвостик более вытянут и не имеет утолщения в своем основании.
Клоака у самцов более вытянута и размещена ближе к концу хвоста, в то время как у самок она внешне напоминает звездочку и расположена близко к основанию.
Форма панциря самки красноухой черепахи обычно более округла, а у самцов панцирь несколько удлинен.
Мордочки у черепах мужского пола часто более заострены, чем мордочки самок.
Кроме того, следует обратить внимание на пластрон (так по-научному называется нижняя часть панциря). У черепах-самцов на его заднем конце имеется V-образный вырез, у самок же данный вырез имеет более округлую форму. К тому же у самцов пластрон заметно вогнут вовнутрь, чего нельзя сказать о нижней части панциря самок.

Что делать, если не получается определиться с полом черепахи?

Предопределение половой судьбы черепахи с определением пола в зависимости от температуры

https://doi.org/10.1016/j.ydbio.2013.11.026Получить права и контент

Основные моменты

•: Мы проверили стохастичность полового акта. судьба на ПвТ в черепахе с ТСД.
•: Гонады одного эмбриона разделяют половую судьбу при раздельном культивировании в PvT.
•: Половую судьбу можно установить к середине термочувствительного периода.

Abstract

Температура инкубации яиц определяет пол потомства у многих видов рептилий, включая красноухих черепах-ползунков, у которых эмбрионы, инкубированные при низких температурах на начальных стадиях образования гонад, развиваются как самцы, а эмбрионы, содержащиеся при более высоких температурах, развиваются как самки. Инкубация при пороговой или основной температуре (PvT) дает равномерное соотношение самцов и самок. Эта сильная восприимчивость к температуре указывает на то, что каждый эмбрион этого вида способен развиваться как самец или самка.Однако механизм, определяющий сексуальную судьбу в PvT, не был идентифицирован. Одна возможность состоит в том, что сексуальная судьба является стохастической в PvT, но координируется системными сигналами в пределах одного эмбриона. В этом случае гонады, эксплантированные в культуру отдельно, не должны согласовывать свою судьбу. Здесь мы показываем, что пары гонад из эмбрионов, инкубированных в PvT, имеют сильную предрасположенность к тому или иному полу при изолированном культивировании, что указывает на то, что на них влияли общие генетические сигналы, материнские гормоны желтка или другие временные воздействия, полученные до этап вскрытия. In ovo исследования, включающие сдвиги от температуры продуцирования самцов или самок к PvT, дополнительно показывают, что эмбрионы принимают траекторию половой дифференцировки за много дней до начала морфологической дифференциации в семенники или яичники и обычно поддерживают эту судьбу в отсутствие экстремальный температурный сигнал, способствующий развитию противоположного пола. Таким образом, наши результаты показывают, что на результат определения пола у этих рептилий сильно влияет (i) врожденная предрасположенность к PvT и (ii) траектория половой дифференциации, установленная на раннем этапе развития гонад при температурах, производимых самцами или самками.

Ключевые слова

Определение пола в зависимости от температуры

Черепаха

Гонад

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Цитирующие статьи

Эпигенетический контроль гонадной ароматазы (cyp19a1) в температурно-зависимом определении пола красноухих черепах-ползунков

Abstract

У красноухой черепахи-ползунка ( Trachemys scripta ), вида с температурно-зависимым определением пола (TSD), экспрессия гена ароматазы во время развития гонад строго ограничена температурой, производящей самку.Основной механизм остается неизвестным. В этом исследовании мы идентифицировали вышестоящую 5′-фланкирующую область гена ароматазы, гонад-специфический промотор и зависимые от температуры сигнатуры метилирования ДНК во время развития гонад у красноухой черепахи-ползунка. 5′-фланкирующая область слайдера ароматазы проявляла сходство последовательностей с генами ароматазы американского аллигатора, курицы, перепела и зебрового вьюрка. Предполагаемый ТАТА-бокс был расположен на 31 п.н. выше гонад-специфичного сайта начала транскрипции.Метилирование ДНК в сайтах CpG между предполагаемыми сайтами связывания фактора домена головы вилки (FOX) и стероидогенного фактора 1 позвоночных (SF1) и соседнего ТАТА-бокса в промоторной области было значительно ниже в эмбриональных гонадах при температуре продуцирования самок по сравнению с температура продуцирования самцов. Сдвиг от мужской к женской, но не от женской к мужской, вызывающей температуру, изменил уровень метилирования ДНК в гонадах. Взятые вместе, эти результаты показывают, что температура, особенно температура продуцирования самок, допускает деметилирование в определенных CpG-сайтах промоторной области, что приводит к температурно-специфической экспрессии ароматазы во время развития гонад.

Образец цитирования: Matsumoto Y, Buemio A, Chu R, Vafaee M, Crews D (2013) Эпигенетический контроль гонадной ароматазы ( cyp19a1 ) в температурно-зависимом определении пола красноухих черепах-слайдеров. PLoS ONE 8 (6): e63599. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599

Редактор: Тоши Сиода, Массачусетская больница общего профиля, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 13 февраля 2013 г .; Принята к печати: 4 апреля 2013 г .; Опубликовано: 7 июня 2013 г.

Авторские права: © 2013 Matsumoto et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Работа была поддержана Национальным научным фондом (номер гранта IOS-1051623). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Определение пола в зависимости от температуры (TSD) является примером пластичности развития, когда температура окружающей среды эмбрионов приводит к развитию бипотенциальных гонад в семенники или яичники. У видов TSD, таких как американский аллигатор и некоторые виды черепах, развитие гонад может быть изменено концентрацией половых стероидных гормонов в окружающей системе эмбрионов. Например, избыток тестостерона или эстрогена во время дифференцировки гонад приводит к развитию яичек или яичников, соответственно, независимо от окружающей температуры [1] — [3].У позвоночных, не являющихся млекопитающими с генотипическим определением пола (GSD), таких как рыбы и земноводные, манипуляции с эмбриональной средой с помощью половых стероидных гормонов часто перекрывают траекторию гонад, заданную генотипами, что приводит к асимметричному соотношению полов при вылуплении [4] — [6]. Ароматаза цитохрома P450, также известная как cyp19a1 или ароматаза, представляет собой фермент, который необратимо катализирует превращение андрогенов в эстрогены и, следовательно, играет центральную роль в балансировании производства стероидных гормонов.Повышенная экспрессия гена ароматазы постоянно наблюдается при дифференциации яичников среди таксонов, тогда как его экспрессия обычно подавляется во время развития семенников [7] — [9]. Блокирование активности ароматазы с помощью ингибиторов ароматазы во время развития гонад также приводит к перенаправлению предполагаемого пола гонад, обычно определяемого генетическими или средовыми сигналами у птиц, рептилий и рыб [10] — [12]. Следовательно, ароматаза считается важным фактором в определении судьбы гонад во время развития у позвоночных, не являющихся млекопитающими.

У красноухой черепахи-ползунка ( Trachemys scripta ) уровень экспрессии ароматазы в гонадах зависит от температуры окружающей среды; высокая экспрессия наблюдается при температуре продуцирования самок (FPT, 31 ° C), тогда как низкая экспрессия наблюдается при температуре продуцирования самцов (MPT, 26 ° C) [13]. Увеличение экспрессии ароматазы в эмбриональных гонадах, инкубируемых в FPT, совпадает с температурно-чувствительным периодом (TSP) развития, когда эмбриональные гонады чувствительны к окружающей температуре [1], [13].Резкое изменение экспрессии гонадароматазы также наблюдается при изменении соотношения полов под действием температуры у рыб и земноводных [9], [14], [15]. Эти данные свидетельствуют о том, что температура регулирует транскрипцию гена ароматазы, что приводит к дифференцировке бипотенциальных гонад по определенному фенотипу гонад. Однако у видов с TSD последовательность и регуляторные механизмы 5′-фланкирующей области гена ароматазы остаются в основном неясными.

Накапливающиеся данные подтверждают, что эпигенетические модификации, такие как модификация гистонов и метилирование ДНК, опосредуют изменения экспрессии специфических генов в ответ на окружающую среду во время развития [16], [17].В частности, уровни метилирования ДНК в регуляторных областях отрицательно коррелируют с уровнем экспрессии генов и часто регулируют временную и пространственную экспрессию генов, связанных с развитием [18] — [21]. Недавние данные, полученные у видов с GSD с температурным влиянием, связали окружающую среду, особенно связанную с температурой регуляцию экспрессии ароматазы, с метилированием ДНК в промоторной области ароматазы [22]. Паттерны развития метилирования ДНК, относящиеся к экспрессии гена ароматазы, которая может регулироваться температурой, никогда не исследовались у видов с TSD.Мы идентифицировали промотор, специфичный для гонад, и вышестоящую 5′-фланкирующую область гена ароматазы и обнаружили температурно-зависимый паттерн метилирования ДНК на предполагаемой промоторной области во время развития гонад у красноухой черепахи-ползунка.

Результаты

5′-вышестоящая область стартового кодона трансляции высоко консервативна среди видов

Мы идентифицировали и секвенировали новую 5′-фланкирующую область гена ароматазы длиной 3944 п.н. Общая последовательность 4066 п.н. была выявлена выше стартового кодона трансляции (ATG), который ранее был идентифицирован у красноухой черепахи-ползунка [23].Мы сравнили гомологию последовательностей этой 5′-фланкирующей области слайдерной ароматазы с другими видами, используя график процентной идентичности (PIP) [24]. В этом анализе 4113 п.н. 5′-фланкирующей области слайдера ароматазы рядом с ATG были выровнены попарно с последовательностью гена ароматазы четырех разных видов: американского аллигатора ( Alligator mississippiensis ), курицы ( Gallus gallus ), перепела. ( Coturnix coturnix ) и зебровый зяблик ( Taeniopygia guttata ). Эти виды были отобраны из-за сходства их последовательностей в 5′-фланкирующей области ароматазы с ароматазой слайдера в соответствии с поиском нуклеотидов BLAST (Национальный центр биотехнологической информации, Bethesda, MD).Анализ гомологии показал, что 5′-фланкирующая последовательность была особенно консервативной в области примерно на 800 п.н. выше ATG (рис. 1). Американский аллигатор, другой вид с TSD, показал наибольшее количество совпадений нуклеотидов во всей сравниваемой области. Сравнение с видами птиц показало, что у зебрового вьюрка было наибольшее количество нуклеотидных совпадений с ароматазой слайдера (рис. 1).

Рис. 1. Анализ гомологии последовательности 5′-фланкирующей области ароматазы у красноухой черепахи-ползунка.

Вновь идентифицированная 4113 п.н. последовательность ароматазы красноухой черепахи (номер доступа в GenBank KC554066), состоящая из 4066 п.н. выше и 47 п.н. ниже стартового кодона трансляции (ATG), была выровнена по парам с последовательности ароматазы (сравниваемая длина п.о. от ATG / общая последовательность п.о.) американского аллигатора (3950/4000), курицы (2614/3229), перепела (2442/4351) и зебрового амадина (1356/1401) с использованием процентной идентичности Сюжет (PIP) Maker [24]. Номера доступа GenBank следующие: аллигатор (AY029233), цыпленок (D50335), перепел (D50336) и зебровый зяблик (AH008871).Дополнительная 5′-фланкирующая область ароматазы аллигатора была извлечена из собранного генома [68]. Горизонтальная ось представляет положение пары оснований последовательности ароматазы красноухой черепахи-ползунка, а вертикальная ось представляет процент нуклеотидного сходства каждого выровненного сегмента (то есть участка ДНК без каких-либо пробелов) с соответствующими видами.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g001

Гонад-специфический сайт старта транскрипции идентифицирован на 122 п.н. выше стартового кодона трансляции

Гонадспецифический сайт начала транскрипции (TSS) ароматазы был идентифицирован на мРНК, которые были очищены из эмбриональных гонад на стадии 16, 19 и 21 при FPT.На этих стадиях экспрессия ароматазы демонстрирует быстрое увеличение эмбриональных гонад, что специфично для FPT [13]. На стадии 16 были обнаружены два различных TSS на 122 и 190 п.н. выше ATG (рисунок S1A). Однако на стадии 19 и 21 большинство клонов продуцировало исключительно мРНК, которая содержала стартовый сайт в положении 122 п.н. (рисунок S1A). Поэтому мы повторно обозначили этот сайт как +1, первый нуклеотид-гуанин, как специфичный для гонад TSS для последующих исследований.

Предполагаемые сайты связывания факторов транскрипции для консервативных факторов определения пола позвоночных обнаружены на 5′-фланкирующей области ароматазы

Затем мы идентифицировали предполагаемые сайты связывания факторов транскрипции (TFBS) на всех 4113 п.н. 5′-фланкирующей области последовательности ароматазы.Предыдущие исследования показали, что следующие факторы транскрипции играют консервативную роль в определении пола позвоночных и демонстрируют температурно-специфические паттерны экспрессии в половых железах во время TSP: стероидогенный фактор 1 (Sf1), рецептор эстрогена (ER), белок L2 вилки головы (FoxL2), двойной секс. и родственный mab-3 фактор транскрипции 1 (Dmrt1) и SRY-бокс 9 (Sox9) [13], [25] — [27]. Поэтому мы исследовали соответствующие сайты связывания SF1, ERE, FOX, DM и SOX соответственно в 5′-фланкирующей области гена ароматазы.Кроме того, накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что факторы теплового шока могут напрямую изменять экспрессию генов, связанных с развитием, помимо своей изначальной роли в регуляции генов теплового шока [28], [29]. Таким образом, сайт связывания фактора теплового шока (HEAT) также был включен в анализ. Мы показываем, что сайты связывания для всех факторов были предсказаны в пределах 5′-фланкирующей области последовательности ароматазы слайдера. Интересно, что местоположения этих сайтов связывания были однозначно распределены в этом восходящем регионе.Сайты связывания SF1 в основном располагались вокруг области TSS и часто перекрывались с ERE (Рисунок 2) из-за сходства их последовательностей [30]. Сайты FOX- и DM-доменов имели тенденцию к тесной кластеризации (то есть множественные сайты связывания в пределах 100 п.н.), тогда как сайты SOX периодически распределялись по всему региону (Рисунок 2). Сайт связывания HEAT был в основном расположен на 5′- или 3′-концах этой фланкирующей области (рис. 2). В этой области не было обнаружено CpG-островков (данные не показаны).

Рисунок 2.Прогнозирование сайтов связывания факторов транскрипции (TFBS) на 5′-фланкирующей области ароматазы.

TFBS были предсказаны с помощью MatInspector (Genomatix). Цветные метки представляют собой TFBS с ориентацией от 5 ‘до 3’ (над линией) или от 3 ‘до 5’ (под линией) относительно сайта начала транскрипции (TSS). SF1: стероидогенный фактор 1 позвоночных, ERE: элементы ответа на эстроген, FOX: факторы домена вилки, DM: фактор транскрипции, содержащий домен DM, SOX: Sox / SRY факторы, определяющие пол / семенник, и связанные с ними факторы HMG-бокса, HEAT: факторы теплового шока .Горизонтальная стрелка представляет собой TSS (+1). Увеличение серого прямоугольника показано на рисунке 3.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g002

Мы также сравнили структуру TFBS в области гомологичной последовательности среди видов (рисунок S2). Приблизительно 700 п.н. 5′-фланкирующей последовательности черепахи-ползунка и четырех других видов были выровнены относительно их TSS. Другие отметили, что TSS ароматазы курицы и перепела были получены из яичников, в то время как TSS ароматазы зебрового вьюрка был идентифицирован как специфический для мозга [31] — [33].Наш сравнительный анализ обнаружил консервативные сайты связывания SF1 / ERE и SOX, которые были расположены в области от -150 до -100 п.н. у черепах, кур и зебровых вьюрков (сплошные стрелки на рисунке S2). Последовательность перепелов не соответствовала этому образцу, хотя последовательности ароматазы перепела и курицы показали общий образец сайтов связывания ERE и FOX непосредственно перед TSS. Последовательность ароматазы слайдера содержала два сайта связывания SOX примерно на -300 п.н., которые были расположены в аналогичной структуре, наблюдаемой в последовательностях цыпленка и перепела (пунктирные стрелки на Фигуре S2).

Характер метилирования ДНК в промоторе ароматазы зависит от температуры инкубации

Уровень метилирования ДНК

в регуляторных регионах часто регулирует временную и пространственную экспрессию генов, связанных с развитием [20], [21]. Мы проверили, различалась ли сигнатура метилирования ДНК в предполагаемой промоторной области в зависимости от температуры инкубации в гонаде ползунка черепахи. Во-первых, область вокруг гонад-специфичного TSS была тщательно исследована в гене ароматазы (серый прямоугольник на рисунке 2).Мы обнаружили TATA-бокс, расположенный на -31 п.н. относительно TSS, рядом с сайтами связывания SOX (рис. 3). Перед блоком ТАТА было расположено несколько сайтов связывания FOX, SF1 / ERE, SOX. Сайты связывания HEAT были обнаружены до и после TSS, а один сайт DM был обнаружен после TSS. Основываясь на присутствии ТАТА-бокса перед гонад-специфическим TSS, мы определили эту 5′-фланкирующую область как предполагаемый промотор ароматазы в дифференцирующихся яичниках.

Рисунок 3. Предполагаемая последовательность промотора ароматазы (от -583 до +170) в гонадах.

Кор-консервативные последовательности (четыре нуклеотида) для сайтов связывания факторов транскрипции (TFBS) и сайтов CpG (I — VII) указаны в цветных и серых прямоугольниках, соответственно. Сайт старта транскрипции, специфичный для гонад (TSS, +1), указан стрелкой. Кодон инициации трансляции, ATG, выделен жирным шрифтом. Последовательности пар праймеров Arom Set5, используемых для анализа метилирования ДНК, подчеркнуты. SF1: стероидогенный фактор позвоночных 1. ERE: элементы эстрогенового ответа. FOX: факторы домена головки вилки.DM: фактор транскрипции, содержащий домен DM. SOX: Sox / SRY факторы, определяющие пол / яички, и связанные с ними факторы HMG-бокса. ТЕПЛО: факторы теплового шока. ТАТА: коробка ТАТА.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g003

Во-вторых, мы сконструировали праймеры Arom Set5 для амплификации промоторной области, содержащей 7 сайтов CpG, которые являются потенциальными мишенями для метилирования ДНК (Рисунок 3), и исследовали метилирование ДНК. уровень. На стадии 16 не было разницы в общем проценте метилирования ДНК в предполагаемом промоторе при двух температурах в гонадах; однако уровни метилирования ДНК были значительно ниже при FPT на стадии 19 и 21 по сравнению с MPT (рис. 4A).Чтобы проверить гипотезу о том, что температура действует, устанавливая сигнатуры метилирования ДНК во время TSP, яйца были переведены на противоположную температуру (то есть MPT → FPT или FPT → MPT) на стадии 16, а статус метилирования исследован на стадиях 19 и 21 (Рисунок 4B для экспериментальной схемы). Предыдущие исследования показали, что температурные сдвиги на стадии 16 полностью изменяют паттерн экспрессии генов и последующую траекторию гонад, создавая фенотип гонад, соответствующий сдвигу температуры у красноухих черепах-ползунков [1], [13], [34].Мы обнаружили, что общий процент метилирования ДНК был значительно ниже в гонадах MPT → FPT по сравнению с контрольным MPT (рис. 4C). Это говорит о том, что деметилирование разрешается изменением температуры на FPT после стадии 16. Однако не было разницы в общем проценте метилирования ДНК между FPT → MPT и контрольными группами FPT (рис. 4D).

Рис. 4. Общий уровень метилирования ДНК предполагаемого промотора ароматазы в гонадах.

Были исследованы общий процент метилирования ДНК во время эмбрионального развития в MPT и FPT (A), MPT, сдвинутый на FPT (C), и FPT, сдвинутый на MPT (D).(B) Схема эксперимента по температурному сдвигу. Каждая полоса представляет от двадцати до двадцати двух клонов / стадию / температуру из данных одного пула из 10 гонад. Звездочка (*) является статистически значимой (p <0,05) согласно точному критерию Фишера. MPT: температура продуцирования самцов. FPT: температура продуцирования самок.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g004

Поскольку паттерны метилирования ДНК часто коррелируют с конкретными сайтами CpG внутри или рядом с TFBS, которые, в свою очередь, влияют на связывание факторов транскрипции [35], Затем мы исследовали уровни метилирования на индивидуальном сайте CpG.На стадии 19 три положения CpG во II, V и VI обнаруживают разные паттерны метилирования при двух температурах инкубации (Рисунок 5A, B). Положение II CpG было расположено между сайтами связывания FOX и SF1 / ERE, а положения V и VI CpG были непосредственно перед и после блока TATA соответственно (рис. 3). Независимо от общего более низкого уровня глобального метилирования при FPT по сравнению с MPT на стадии 21, ни один из отдельных сайтов CpG существенно не отличался по уровню метилирования при двух температурах инкубации (рис. 5A, B).В гонадах с температурным смещением CpG в положении VII на стадии 19 и положении V на стадии 21 были значительно ниже при MPT → FPT, чем при MPT (рис. 6A, B). При обработке FPT → MPT уровень метилирования ДНК в позиции VII CpG на стадии 19 был значительно ниже по сравнению с контрольным FPT; однако ни один из других отдельных сайтов не был метилирован по-разному в зависимости от температуры инкубации (рис. 6A, B).

Рис. 5. ДНК-метилирование предполагаемого промотора ароматазы на индивидуальном сайте CpG в гонадах.

(A) Статус метилирования ДНК в клонах гонад на стадии эмбриона 16, 19 и 21 при MPT и FPT. Каждая строка представляет один клон (1–20 ~ 22 клона / стадия / температура), а столбец представляет положение CpG (I — VII). Открытые кружки: неметилированные сайты CpG. Закрашенные кружки: метилированные сайты CpG. (B) Процентное метилирование ДНК на индивидуальном сайте CpG (I — VII) предполагаемого промотора ароматазы на стадии 16, 19 и 21 в ползунковой гонаде. Звездочка (*) является статистически значимой (p <0.05) согласно точному критерию Фишера. MPT: температура продуцирования самцов. FPT: температура продуцирования самок.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g005

Рис. 6. Метилирование ДНК предполагаемого промотора ароматазы на индивидуальном сайте CpG в гонадах с температурным смещением.

На эмбриональной стадии 16 яйца переводятся на противоположную температуру, MPT на FPT (A, C) и FPT на MPT (B, D). (A, B) Статус метилирования ДНК в клонах гонад на эмбриональной стадии 19 и 21 после температурного сдвига.Каждая строка представляет один клон (1-21-22 клона / стадия / температура), а столбец представляет положение CpG (I-VII). Открытые кружки: неметилированные сайты CpG. Закрашенные кружки: метилированные сайты CpG. (C, D) Процентное метилирование ДНК на индивидуальном сайте CpG (I — VII) предполагаемого промотора ароматазы на стадии 19 и 21 в гонаде слайдера. Звездочка (*) является статистически значимой (p <0,05) согласно точному критерию Фишера. MPT: температура продуцирования самцов. FPT: температура продуцирования самок.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.g006

Обсуждение

Ароматаза является важным фактором определения и дифференциации гонад у позвоночных, не являющихся млекопитающими. Большинство исследований на сегодняшний день ограничено профилями экспрессии генов при дифференцировке гонад. В этом исследовании мы впервые идентифицировали у видов TSD зависимые от температуры эпигенетические сигнатуры внутри гонад-специфичного промотора гена ароматазы. У большинства млекопитающих, птиц и амфибий ген ароматазы имеет несколько TSS, управляемых тканеспецифическими промоторами, производящими уникальные 5′-нетранслируемые области, которые альтернативно сплайсируются вместе с общей кодирующей областью [36] — [39].У рыб тканеспецифические транскрипты ароматазы, в основном изучаемые в яичниках и головном мозге, происходят от двух или более различных гомологичных генов [40] — [42]. Неизвестно, имеет ли ген ароматазы красноухой черепахи несколько тканеспецифичных TSS или гомологичных генов. Тем не менее, TSS в развивающихся яичниках, идентифицированный в текущем исследовании, вероятно, специфичен для гонад, согласно предыдущим наблюдениям у разных видов. Это исследование также привело к открытию интрона длиной 1754 п.н. на +265 п.н. относительно TSS.Последовательность была отправлена в GenBank вместе с 5′-фланкирующей областью (номер доступа GenBank KC554066).

Наше предсказание для TFBS в 5′-фланкирующей области ароматазы выявило потенциальные механизмы регуляции цис экспрессии гена ароматазы. Мы обнаружили несколько сайтов SF1, расположенных в пределах 500 п.н. выше стартового кодона трансляции (рис. 2). SF1 представляет собой орфанный ядерный рецептор, необходимый для регуляции генов, связанных с воспроизводством, и демонстрирует скоординированный паттерн экспрессии генов с ароматазой в развивающихся яичниках у нескольких видов [13], [43] — [45].Другие показали, что SF1 стимулирует активность промотора ароматазы как in vivo, и in vitro, [46] — [48]. Мы обнаружили один сайт SF1, расположенный в пределах 150 п.н. выше гонад-специфичного TSS в слайдерной ароматазе; этот же сайт наблюдается и у других видов и поэтому является высококонсервативным (рис. S2). У слайдера ароматазы также был другой сайт SF1, специфичный только для этого вида, сразу после TSS (рисунок S2). ERE, потенциальные сайты связывания для ER, также были обнаружены в 5′-фланкирующей области ползунковой ароматазы (рис. 2).Соответственно, ERE обычно наблюдается в промоторе специфической для яичников ароматазы у рыб и земноводных [49] — [51]. Ранее мы отмечали, что введение эстрогена в яйца, инкубированные при MPT, увеличивало экспрессию гонадной ароматазы, тогда как блокирование эндогенного эстрогена при FPT подавляло экспрессию ароматазы в красноухом слайдере (неопубликованные данные). Это открытие предполагает, что эстроген имеет положительную обратную связь с экспрессией ароматазы на уровне транскрипции во время развития гонад. Сайты связывания для FOX и DM демонстрировали различные паттерны, которые тесно группировались (т.е.е., множественные сайты связывания в пределах 100 п.н.) на 5′-фланкирующей области (рис. 2). Оба фактора транскрипции FoxL2 и Dmrt1 могут напрямую регулировать экспрессию гена ароматазы положительным и отрицательным образом, соответственно, как показано в исследованиях in vivo и in vitro [52] — [54]. Кроме того, экспрессия генов FoxL2 и Dmrt1 является взаимоисключающей в бипотенциальных гонадах, что позволяет предположить другой уровень комплементарной регуляции генов в определении яичников по сравнению с другими.семенники [27], [55], [56].

Ранее мы показали, что экспрессия ароматазы в гонадах подавлялась при обеих температурах инкубации на стадии 16, но при FPT после этого быстро увеличивалась [13]. Точно так же мы не наблюдали разницы температур в уровне метилирования на стадии 16, но значительно более низкие уровни метилирования на FPT на стадиях 19 и 21 (Рисунок 4A). Это предполагает, что низкий уровень метилирования ДНК в промоторной области ответственен за FPT-специфическое увеличение экспрессии ароматазы.Более того, этот температурно-зависимый паттерн метилирования, по-видимому, устанавливается между стадиями 16 и 19 (Рис. 4A). Наша обработка температурного сдвига MPT → FPT показала, что сигнала FPT после стадии 16 было достаточно для деметилирования промотора ароматазы (рис. 4C). Интересно, что температурный сдвиг FPT → MPT не приводит к увеличению уровня метилирования (рис. 4D). Это указывает на то, что деметилирование является чувствительным к температуре процессом, однако инициация метилирования не зависит от температурного сигнала после стадии 16.

Мы дополнительно исследовали, метилирован ли какой-либо отдельный сайт CpG, чтобы предсказать потенциальное взаимодействие факторов транскрипции с промоторной областью. Наше исследование показало, что сайт CpG, расположенный между сайтами FOX и SF1, был менее метилирован при FPT, чем MPT на стадии 19 (Рисунок 5). FoxL2 — один из самых ранних маркеров яичников, который экспрессируется в дифференцировке гонад у разных видов [57] — [59]. Исследования in vitro показывают, что FoxL2 вместе с SF1 может усиливать экспрессию ароматазы путем прямого взаимодействия с сайтом связывания вилки промотора [52], [53].Наше открытие предполагает, что низкий уровень метилирования может позволить FoxL2 связываться с этим сайтом в FPT, что приводит к транскрипционной активации ароматазы. Мы также обнаружили, что два сайта CpG, расположенные непосредственно перед и после блока TATA, имели значительно низкий уровень метилирования при FPT (рис. 4). ТАТА-бокс представляет собой последовательность-мишень для ТАТА-бокса-связывающего белка и, следовательно, является сайтом для рекрутирования РНК-полимеразы II [60], [61]. Наши данные показывают, что дифференциальные сигнатуры метилирования по температуре инкубации рядом с ТАТА-боксом могут быть ответственны за сборку комплекса инициации транскрипции.Наварро-Мартин и другие наблюдали, что воздействие на эмбрионы морского окуня высокой температуры, которая коррелирует с предвзятым отношением полов к самцам, приводит к увеличению метилирования ДНК в области промотора ароматазы [22]. Кроме того, они сообщают о дифференциально метилированных сайтах CpG, обусловленных температурой инкубации рядом с сайтом связывания Fox и ТАТА-боксом внутри промотора. Несмотря на небольшое сходство последовательностей между промоторами ароматазы слайдера и морского окуня, наши результаты согласуются с их наблюдениями, что дополнительно подтверждает, что температура изменяет характер метилирования ДНК в определенных сайтах CpG в промоторе ароматазы в гонадах.Интересно, что дифференциальные паттерны метилирования ДНК в отдельных сайтах CpG исчезают на стадии 21 (Рисунок 5), независимо от непрерывного увеличения экспрессии генов при FPT [13]. У млекопитающих экспрессия онтогенетических генов, по крайней мере частично, регулируется повторением метилирования de novo и деметилирования регуляторных областей [62] — [64]. Возможно, что паттерн метилирования ДНК, наблюдаемый на индивидуальном сайте CpG, является временной меткой для инициации транскрипции ароматазы, тогда как поддержание транскрипции на следующих стадиях может опосредоваться различными механизмами.

Хотя общий уровень метилирования ДНК был снижен в гонадах MPT → FPT, мы не обнаружили последовательного паттерна метилирования ДНК в положениях CpG II, V и VI в наших экспериментах по температурному сдвигу (сравните Рисунок 5 с Рисунок 6A). Эти наблюдения показывают, что температурный сдвиг на стадии 16 недостаточен для установления паттерна метилирования ДНК, специфичного для сайтов CpG. Возможно, что эпигенетические метки, не ограниченные метилированием ДНК или геном ароматазы, могут быть установлены в гонадах до стадии 16, но после стадии 16 может быть затронут только уровень метилирования.Мы также не можем исключить возможность того, что процент метилирования ограничен количеством колоний, исследованных методом субклонирования. Стоит отметить, что позиция VII CpG, расположенная после специфичного для гонад TSS, имеет значительно более низкое метилирование при обоих температурных сдвигах (Figure 6A, B). У нас в настоящее время нет объяснения этому наблюдению, хотя метилирование в этом положении CpG, по-видимому, специфично для обработки температурного сдвига, поскольку оно не наблюдалось в гонадах при постоянной температуре.Хотя влияние температуры на уровень метилирования ДНК изучалось в основном на растениях [65], [66], до сих пор неясно, как температура влияет на метилирование ДНК у позвоночных, не являющихся млекопитающими. Наиболее вероятно, что динамические эпигенетические изменения в определенном наборе генов происходят во время детерминации гонад. Текущее исследование эпигенетических профилей промотора ароматазы, помеченного температурой, обеспечит дальнейшее понимание процесса системы TSD и в конечном итоге поможет понять механизмы, лежащие в основе пластичности развития.

Материалы и методы

Коллекция тканей

Свежеотнесенные яйца красноухой черепахи были получены с фермы Clark Turtle Farm (Хаммонд, Лос-Анджелес) и содержались в соответствии с гуманными методами содержания животных в соответствии с протоколом IACUC. Протокол был одобрен IACUC (протокол № AUP-2011-00149) Техасского университета в Остине. Яйца хранили при комнатной температуре в течение 10 дней для оценки жизнеспособности эмбрионов и случайным образом распределяли по инкубаторам при MPT (26 ° C) или FPT (31 ° C) с увлажненным вермикулитом.Температуру инкубатора контролировали ежедневно с помощью термометров и регистраторов данных HOBO (Onset Computer Corp., Bourne, MA). Яйца инкубировали до эмбриональной стадии 16 по Гринбауму [67], после чего эмбриональные гонады стали реагировать на температуру окружающей среды, то есть до начала TSP. Для определения TSS, специфичного для гонад, объединенные гонады (n = 6 гонад / стадия) из стадий 16, 19 и 21 на FPT, соответствующих началу, середине и концу TSP, соответственно, были помещены в 800 мкл Trizol ( Life Technologies, Гранд-Айленд, штат Нью-Йорк), перемешивали и хранили при -80 ° C до полной экстракции РНК.TSS не исследовался в MPT, потому что транскрипты ароматазы обычно не обнаруживаются при этой температуре [13].

Для анализа метилирования гонады (n = 10 гонад / температура) при каждой температуре (MPT или FPT) объединяли на стадии 16 в качестве базового контроля и мгновенно замораживали в жидком азоте (LN ₂) для последующих анализов. Десять яиц постоянно держали при MPT или FPT, в то время как десять других яиц переводили в противоположный температурный режим на стадии 16. На стадии 19 и 21 гонады (n = 10) из каждой группы обработки были объединены, мгновенно заморожены в LN _2., и хранили при -80 ° C до обработки бисульфитом.Этими группами были MPT, FPT, MPT, переведенный в FPT (MPT → FPT), или FPT, переведенный в MPT (FPT → MPT). Для клонирования 5′-фланкирующей области ароматазы ткани, включая комплекс надпочечников и почки, печень или голову, собирали отдельно от вылупившихся FPT, быстро замораживали в LN ₂ и хранили при -80 ° C для геномных Экстракция ДНК (гДНК).

Клонирование и анализ последовательности 5′-фланкирующей области

5′-фланкирующую область перед стартовым кодоном ATG гена ароматазы клонировали с использованием Genome Walker Universal Kit (Clontech, Mountain View, CA) в соответствии с протоколом производителя.Вкратце, замороженные ткани черепахи при вылуплении измельчали в LN ₂, используя ступку и пестик, и расщепляли в буфере для лизиса (10 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 0,1 М ЭДТА, pH 8,0, 0,5% SDS), содержащем 10 мкг РНКазы A при 37 ° С. ° C в течение 1 ч. Протеиназу К (50 мкг) добавляли к лизату для инкубации в течение ночи при 55 ° C. гДНК экстрагировали обычным фенол-хлороформным методом и осаждали этанолом (EtOH). Чистота гДНК была подтверждена наличием мазка на 0,6% агарозном геле после переваривания рестриктазой DraI.гДНК, выделенная из головы, имела наиболее отчетливый мазок после переваривания DraI, поэтому была использована для последующих анализов.

Для создания библиотек гДНК расщепляли рестрикционными ферментами, DraI, EcoRV, PvuII или StuI, чтобы получить четыре библиотеки. В качестве положительного контроля гДНК человека, поставляемая с набором, была расщеплена Pvu II. Расщепленную гДНК очищали фенол-хлороформным методом и лигировали с адаптером Genome Walker ^TM. Два обратных праймера, праймер, специфичный для гена ароматазы (Arom GSP) 1 и Arom GSP2, были сконструированы на основе известной слайдерной последовательности ароматазы первого экзона (номер доступа GenBank.AF178949). Последовательности и расположение праймеров указаны в таблице 1 и на рисунке S3. Все праймеры в этом исследовании были приобретены в компании Integrated DNA technologies (IDT, Coralville, IA). Каждую библиотеку амплифицировали с помощью Arom GSP1 и адаптера-специфического праймера (ASP) 1, поставляемого с набором, с использованием смеси полимераз Advantage 2 (Clontech) в следующих условиях ПЦР: 7 циклов по 25 секунд при 94 ° C и 3 мин при 72 ° C. с последующими 32 циклами по 25 секунд при 94 ° C, 3 минуты при 67 ° C и 7 минут при 67 ° C. Затем продукты ПЦР разбавляли в соотношении 1-50 деионизированной H ₂ O для проведения второго раунда вложенной ПЦР с использованием праймеров Arom GSP2 и ASP2 в следующих условиях ПЦР: 5 циклов по 25 с при 94 ° C и 3 мин при 72 ° C. ° C, 20 циклов по 25 секунд при 94 ° C, 3 минуты при 67 ° C и 7 минут при 67 ° C.Вторые продукты ПЦР визуализировали на 1,5% агарозном геле, экстрагировали с использованием набора для экстракции геля (Qiagen, Germantown, MD) и клонировали в векторе pGEM-T (Promega, Madison, WI) для секвенирования. Каждая библиотека производила продукты ПЦР разного размера (данные не показаны), которые впоследствии выравнивали для идентификации новой последовательности 5′-фланкирующей области ароматазы. Дополнительные обратные праймеры Arom GPS (последовательности не показаны) были сконструированы на основе этой 5′-фланкирующей области для повторения процессов ПЦР и субклонирования в существующих библиотеках гДНК до тех пор, пока не будут идентифицированы приблизительно 4 т.п.н. вновь идентифицированной 5′-фланкирующей области и последовательность.С помощью ПЦР генерировали целую 5′-фланкирующую область, и восемь клонов выравнивали для наилучшего предсказания последовательности. Секвенированные данные были отправлены в GenBank (инвентарный номер KC554066). TFBS для стероидогенного фактора 1 позвоночных (SF1), элементов эстрогенового ответа (ERE), факторов доменного домена вилки (FOX), фактора транскрипции, содержащего домен DM, определения sox / SRY-пола / семенников и связанных факторов HMG-бокса (SOX) и фактор теплового шока (HEAT) на 5′-фланкирующей области ароматазы определяли с помощью MatInspector (Genomatix, Мюнхен, Германия).Островки CpG в 5′-фланкирующей области исследовали с использованием графика CpG (Европейский институт биоинформатики, Кембридж, Великобритания).

Анализ гомологии последовательностей

Приблизительно 4 т.п.н. недавно идентифицированной 5′-фланкирующей области последовательности ароматазы слайдера сравнивали с 5′-расположенной выше областью известной последовательности ароматазы у других видов (номер доступа в GenBank), включая аллигатора (AY029233), цыпленка. (D50335), перепел (D50336) и зебровый зяблик (AH008871) с использованием PIPMaker [24].Поскольку доступность 5′-фланкирующей области ароматазы аллигатора была ограничена в базе данных GenBank, из недавно собранного генома была извлечена дополнительная область размером 4 т.п.н. TFBS промоторных областей среди этих видов были проанализированы с помощью MatInspector и выровнены в соответствии с сообщенными специфическими для гонад или головного мозга TSS гена ароматазы [32], [33].

Идентификация гонадспецифического сайта начала транскрипции

Чтобы идентифицировать гонадоспецифический TSS в 5′-фланкирующей области ароматазы, мы провели опосредованную модифицированной РНК-лигазой быструю амплификацию концов кДНК (RLM-5’RACE), описанную Bohm et al.[69]. RLM-5’RACE может точно определять TSS, отслеживая 5′-шапку мРНК, тогда как обычная 5′-RACE не отслеживает 5′-шапку, поэтому не может отличить деградированные сообщения мРНК от полных сообщений (сравните A с B в Рисунок S1). Вкратце, тотальную РНК экстрагировали из объединенных гонад на стадии 16, 19 и 21 эмбриона при FPT (n = 6 / стадия) с помощью Trizol в соответствии с протоколом производителя. Пять микрограммов общей РНК обрабатывали не содержащей ДНК Turbo DNase I (Life technologies).ДНКаза I и все последующие ферментативные реакции сопровождались экстракцией фенол: хлороформ: изоамиловый спирт (50∶49∶1; Sigma-Aldrich, S. Louis, MO) для инактивации ферментов, и РНК осаждали EtOH в присутствии 10 блок ингибитора РНКазы, RNaseOUT (Life technologies). Очищенную тотальную РНК дефосфорилировали 10 единицами щелочной фосфатазы из кишечника теленка (CIP; NEB, Ipswich, MA) при 42 ° C в течение 2 часов. После очистки 5′-колпачок удаляли с помощью 0,5 единиц табачной кислотной пирофосфатазы (TAP; Epicenter, Madison, WI) при 37 ° C в течение 1 часа.В качестве отрицательного контроля РНК, обработанную CIP на каждой стадии, инкубировали в отсутствие TAP. Для приготовления олигоадаптера двухцепочечной РНК, прямого праймера DipromF, содержащего прямые последовательности T7 и T3 (5′-TTA ATA CGA CTC ACT ATA GGG CCC AGA ATT AAC CCT CAC TAA AGG GA) и обратную комплементарную последовательность DiPromF, Был разработан обратный праймер RCDPromR. Один микрограмм каждого праймера инкубировали вместе с 10-кратным буфером ДНК-лигазы Т4 (NEB) при 95 ° C в течение 5 минут и помещали в термоблок 65 ° C, который затем оставляли при комнатной температуре для естественного охлаждения до температуры окружающей среды (приблизительно 26 ° C). В) для процесса медленного отжига.

Двухцепочечная ДНК-олиго была in vitro, -транскрибирована в РНК-олиго с использованием набора mMESSAGE mMACHINE T7 (Life technologies) в соответствии с протоколом производителя. Конечная концентрация олиго РНК после транскрипции Т7 составляла приблизительно 50 мкг. 10 мкМ олигоадаптера РНК лигировали с декапированной РНК с использованием 5 единиц РНК-лигазы Т4 (NEB) при 37 ° C в течение 1,5 часов. Лигированные продукты подвергали обратной транскрипции 200 единицами обратной транскриптазы SuperScript III (Life technologies) с использованием 2 пмоль обратного праймера Arom GSP5 (таблица 1, рисунок S3).КДНК амплифицировали с прямым праймером DiPromF вместе с обратным праймером Arom GSP 4 (таблица 1, рисунок S3) с использованием полимеразы Taq (Life technologies) в следующих условиях ПЦР: 3 мин при 94 ° C, 35 циклов по 45 секунд при 94 ° C. C, 30 секунд при 58 ° C и 2 мин при 72 ° C, а также дополнительное продление на 10 минут при 72 ° C. Второй раунд вложенной ПЦР проводили с разведением 1-50 продукта ПЦР с использованием праймера DiPromF и праймера Arom GSP3 (таблица 1, рисунок S3). Продукты ПЦР были визуализированы и извлечены из 1.5% агарозный гель, субклонированный в вектор pGEM-T, и первый нуклеотид на 5′-конце в каждом клоне подтверждали секвенированием. Ни один из отрицательных контролей, не обработанных TAP, не давал отчетливой полосы на 1,5% агарозном геле (данные не показаны). Приблизительно 22–28 клонов с каждой стадии анализировали для определения TSS, специфичного для гонад, в анализе последовательности.

Анализ метилирования ДНК

Состояние метилирования ДНК

в области гонадспецифического TSS (от -571 до +23 относительно положения TSS, рассчитанного как +1) гена ароматазы слайдера исследовали с использованием набора EZ DNA Methylation-Direct (Zymo research, Irvine, CA).Десять объединенных гонад, взятых у эмбрионов на стадии 16, 19 и 21, инкубировали при MPT, FPT, MPT → FPT и FPT → MPT. Их обрабатывали протеиназой К и бисульфитом и очищали в соответствии с протоколом производителя. Очищенную гДНК амплифицировали с использованием смеси полимеразы Advantage 2 с праймером Arom Set5F, 5′-GGY GTT AGG TTT GAT GAA TTT ATG GTT TGG-3 ‘и праймером Arom Set5R, 5′-ACA CCT TTA ATC RAT ACC TTA CAA CCC -3’ в следующих условиях ПЦР: 1 мин при 95 ° C, 35 циклов по 30 сек при 95 ° C, 1 мин при 56 ° C, 1 мин при 68 ° C и 10 мин при 72 ° C в течение 10 мин.Продукты ПЦР очищали в геле и субклонировали, как описано выше. Средняя скорость превращения бисульфита составляла> 99%, что было рассчитано по количеству преобразованного цитозина, связанного с негуанинами. Клоны со степенью конверсии менее 97% были исключены из анализа, чтобы избежать ошибочного определения неполной конверсии бисульфита как допустимого метилирования ДНК. Последовательному анализу подвергали 20–22 клона на стадию / группу.

Статистический анализ

Соотношение метилированного и неметилированного CpG в каждой позиции сравнивали между группами лечения (MPT против FPT, MPT против MPT → FPT или FPT против FPT → MPT) с помощью точного теста Фишера с использованием R (проект R для статистических вычислений, Вена , Австрия).Значение p менее 0,05 считалось статистически значимым.

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Нуклеотидное положение гонадспецифичных стартовых сайтов транскрипции (TSS) ароматазы у красноухой черепахи-ползунка. TSS были исследованы в общей РНК из объединенных гонад на стадии эмбриона 16, 19 и 21 на стадии FPT (n = 6 / стадия) с использованием (A) опосредованной РНК-лигазой быстрой амплификации концов кДНК (RLM-5’RACE) и ( B) Обычный 5’RACE с использованием набора для амплификации кДНК SMART ^TM RACE (Clontech).Ось X представляет собой расстояние в парах оснований от кодона начала трансляции (ATG), а ось Y представляет количество исследованных клонов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.s001

(TIF)

Рисунок S2.

Сравнительный анализ сайтов связывания факторов транскрипции (TFBS) гена ароматазы среди видов. TFBS примерно на 700 п.н. из 5′-фланкирующих областей, включая кодон инициации трансляции (ATG) и сайт начала транскрипции (TSS) красноухой черепахи-ползунка и четырех других видов, были предсказаны с помощью MatInspector (Genomatix) и выровнены относительно к TSS, специфичным для гонад или головного мозга.Номера этих видов в GenBank следующие: аллигатор (AY029233), цыпленок (D50335), перепел (D50336) и зебровый зяблик (AH008871). Пунктирные линии указывают на отсутствующую информацию о последовательности ароматазы аллигатора в GenBank. Цветные метки представляют собой TFBS с ориентацией от 5 ‘до 3’ (над линией) или от 3 ‘до 5’ (под линией) относительно TSS. Цветовые коды факторов транскрипции следующие: розовый: SF1 (стероидогенный фактор 1 позвоночных), светло-зеленый: ERE (элементы ответа на эстроген), охра: FOX (факторы домена головы вилки), темно-зеленый: DM (транскрипция, содержащая домен DM. фактор), фиолетовый: SOX (определение Sox / SRY-пола / яичка и связанные факторы бокса HMG) и темно-синий: HEAT (факторы теплового шока).ТАТА: коробка ТАТА. Горизонтальная черная стрелка: TSS. Обратный треугольник: ATG. Сплошные вертикальные стрелки: консервативные сайты связывания SF1 / ERE и Sox. Пунктирные вертикальные стрелки: консервативные сайты связывания SOX.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.s002

(TIF)

Рисунок S3.

Взаимное расположение разработанных праймеров в Таблица 1 . Черная линия: известная последовательность кДНК ароматазы красноухой черепахи-ползунка (номер доступа в GenBank AF178949).Оранжевая линия: неизвестная 5′-фланговая область. Черные стрелки: положения обратного праймера (GSP), специфичного для гена ароматазы. Кодон начала трансляции, ATG был ранее идентифицирован у красноухой черепахи-ползунка [23].

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063599.s003

(TIF)

Благодарности

Мы благодарны Р. Бому и А. Шиндо за полезные советы в экспериментах и анализе данных, а также К. Кусиро и Т. Хаттори за комментарии к рукописи.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: YM DC.Проведены эксперименты: YM AB RC MV. Проанализированы данные: YM DC. Написал бумагу: YM DC.

Ссылки

1. Wibbels T, Bull JJ, Crews D (1991) Хронология и морфология определения пола в зависимости от температуры. J Exp Zool 260: 371–381
2. Crews D (1996) Определение пола в зависимости от температуры: взаимодействие стероидных гормонов и температуры. Zool Sci 13: 1–13.
3. Guillette LJ, Crain DA, Gunderson MP, Kools SAE, Milnes MR, et al.(2000) Аллигаторы и контаминанты, нарушающие работу эндокринной системы: текущая перспектива. Американский зоолог 40: 438–452
4. Уоллес Х., Бадави Г.М., Уоллес Б.М. (1999) Определение пола амфибий и изменение пола. Cell Mol Life Sci 55: 901–909.
5. Wu GC, DU JL, Lee YH, Lee MF, Chang CF (2005) Текущее состояние генетических и эндокринных факторов в изменении пола протандрических черных поросят, Acanthopagrus schlegeli (Teleostean). Ann N Y Acad Sci 1040: 206–214
6.Кодзима Ю., Бхандари Р.К., Кобаяши Ю., Накамура М. (2008) Изменение пола взрослых самцов губанов в начальной фазе, Halichoeres trimaculatus, обработкой бета-эстрадиолом-17. Gen Comp Endocrinol 156: 628–632
7. Smith CA, Andrews JE, Sinclair AH (1997) Гонадная половая дифференциация у куриных эмбрионов: экспрессия генов рецептора эстрогена и ароматазы. Дж. Стероид Биохим Мол Биол 60: 295–302.
8. Kuntz S, Chesnel A, Flament S, Chardard D (2004) На экспрессию церебральной и гонадной ароматазы по-разному влияет половая дифференциация Pleurodeles waltl.J Mol Endocrinol 33: 717-727
9. Sakata N, Tamori Y, Wakahara M (2005) Экспрессия ароматазы P450 в чувствительной к температуре половой дифференциации гонад саламандры (Hynobius retardatus). Int J Dev Biol 49: 417–425
10. Эльбрехт А., Смит Р.Г. (1992) Активность фермента ароматазы и определение пола у кур. Наука 255: 467–470.
11. Crews D, Bergeron JM (1994) Роль редуктазы и ароматазы в определении пола у красноухого ползунка (Trachemys scripta), черепахи с зависимым от температуры определением пола.J Endocrinol 143: 279–289.
12. Китано Т., Такамуне К., Нагахама Ю., Абэ С.И. (2000) AID-MRD1> 3.0.CO; 2-3.
13. Ramsey M, Shoemaker C, Crews D (2007) Гонадная экспрессия Sf1 и ароматазы во время определения пола у красноухой черепахи-ползунка (Trachemys scripta), рептилии с зависимым от температуры определением пола. Дифференциация 75: 978–991
14. Kitano T, Takamune K, Kobayashi T, Nagahama Y, Abe SI (1999) Подавление экспрессии гена ароматазы P450 у самцов с измененным полом, полученное путем выращивания генетически женских личинок при высокой температуре воды в период половой дифференциации у японской камбалы ( Paralichthys olivaceus).J Mol Endocrinol 23: 167–176.
15. D’Cotta H, Fostier A, Guiguen Y, Govoroun M, Baroiller JF (2001) Ароматаза играет ключевую роль во время нормальной и обусловленной температурой половой дифференциации тилапии Oreochromis niloticus. Мол Репрод Дев 59: 265–276
16. Гилберт С.Ф., Эпель Д. (2008) Экологическая биология развития. 1-е изд. Sinauer Associates. 459 с.
17. Burdge GC, Lillycrop KA (2010) Питание, эпигенетика и пластичность развития: значение для понимания болезней человека.Анну Рев Нутр 30: 315–339
18. Разин А., Шемер Р. (1995) Метилирование ДНК в раннем развитии. Hum Mol Genet 4 Номер спецификации: 1751–1755.
19. Зигфрид З., Иден С., Мендельсон М., Фенг Х, Цубери Б.З. и др. (1999) Метилирование ДНК подавляет транскрипцию in vivo. Нат Генет 22: 203–206
20. Бруннер А.Л., Джонсон Д.С., Ким С.В., Валуев А., Редди Т.Э. и др. (2009) Отчетливые паттерны метилирования ДНК характеризуют дифференцированные эмбриональные стволовые клетки человека и развивающуюся эмбриональную печень человека.Genome Res 19: 1044–1056
21. Borgel J, Guibert S, Li Y, Chiba H, Schübeler D и др. (2010) Цели и динамика метилирования промоторной ДНК во время раннего развития мышей. Нат Генет 42: 1093–1100
22. Наварро-Мартин Л., Виньяс Дж., Рибас Л., Диас Н., Гутьеррес А. и др. (2011) ДНК-метилирование промотора гонадной ароматазы (cyp19a) участвует в температурно-зависимых сдвигах соотношения полов у европейского морского окуня. PLoS Genet 7: e1002447
23.Murdock C, Wibbels T (2003) Клонирование и экспрессия ароматазы у черепахи с определением пола в зависимости от температуры. Gen Comp Endocrinol 130: 109–119.
24. Шварц С., Чжан З., Фрейзер К.А., Смит А., Ример С. и др. (2000) PipMaker — веб-сервер для выравнивания двух последовательностей геномной ДНК. Genome Res 10: 577–586.
25. Ramsey M, Crews D (2007) Стероидная сигнальная система по-разному реагирует на манипуляции с температурой и гормонами у красноухой черепахи-ползунка (Trachemys scripta elegans), рептилии с зависимым от температуры определением пола.Пол Дев 1: 181–196
26. Shoemaker C, Ramsey M, Queen J, Crews D (2007) Экспрессия Sox9, Mis иDmrt1 в гонаде видов с зависимым от температуры определением пола. Дев Дин 236: 1055–1063
27. Мацумото Ю., Крюс Д. (2012) Молекулярные механизмы определения пола в зависимости от температуры в контексте экологической биологии развития. Молекулярная и клеточная эндокринология 354: 103–110
28. Абане Р., Мезгер В. (2010) Роль факторов теплового шока в гаметогенезе и развитии.FEBS J 277: 4150–4172.
29. Акерфельт М., Моримото Р.И., Систонен Л. (2010) Факторы теплового шока: интеграторы клеточного стресса, развития и продолжительности жизни. Nat Rev Mol Cell Biol 11: 545–555
30. O’Lone R, Frith MC, Karlsson EK, Hansen U (2004) Геномные мишени ядерных рецепторов эстрогена. Мол эндокринол 18: 1859–1875
31. Matsumine H, Herbst MA, Ou SH, Wilson JD, McPhaul MJ (1991) мРНК ароматазы во внегонадных тканях цыплят с признаком курятины-оперения получена из отличительной структуры промотора, которая содержит сегмент длинного концевого повтора ретровируса.Функциональная организация генов ароматазы Sebright, Leghorn и Campine. J Biol Chem 266: 19900–19907.
32. Кудо Т., Ямамото Х., Сато С., Сутоу С. (1996) Сравнение 5′-восходящих областей генов ароматазы курицы и перепела. Журнал воспроизводства и развития 42: 101–107
33. Ramachandran B, Schlinger BA, Arnold AP, Campagnoni AT (1999) Экспрессия гена ароматазы зябликов регулируется в мозге через альтернативный промотор. Gene 240: 209–216.
34. Shoemaker-Daly CM, Jackson K, Yatsu R, Matsumoto Y, Crews D (2010) Генетическая сеть, лежащая в основе зависимого от температуры определения пола, эндогенно регулируется температурой в изолированных культивируемых гонадах Trachemys scripta. Дев Дин 239: 1061–1075
35. Штраусман Р., Нейман Д., Робертс Д., Стейнфельд И., Блюм Б. и др. (2009) Развитие программирования профилей метилирования CpG-островков в геноме человека. Нат Структ Мол Биол 16: 564–571
36.Means GD, Kilgore MW, Mahendroo MS, Mendelson CR, Simpson ER (1991) Тканеспецифические промоторы регулируют экспрессию гена цитохрома P450 ароматазы в тканях яичников и плода человека. Мол Эндокринол 5: 2005–2013.
37. Simpson ER, Clyne C, Rubin G, Boon WC, Robertson K и др. (2002) Ароматаза — краткий обзор. Анну Рев Физиол 64: 93–127
38. Булун С.Е., Лин З., Имир Г., Амин С., Демура М. и др. (2005) Регулирование экспрессии ароматазы при эстроген-зависимых заболеваниях груди и матки: от скамьи к лечению.Pharmacol Rev 57: 359–383
39. Ивабучи Дж., Вако С., Танака Т., Исикава А., Йошида Ю. и др. (2007) Анализ экспрессии гена ароматазы p450 в мозге и гонаде Xenopus. Дж. Стероид Биохим Мол Биол 107: 149–155
40. Chiang EF, Yan YL, Tong SK, Hsiao PH, Guiguen Y, et al. (2001) Характеристика дублированных генов cyp19 рыбок данио. J Exp Zool 290: 709–714.
41. Чоудакова А., Кишида М., Вуд Е., Каллард Г. В. (2001) Характеристики промотора двух генов cyp19, дифференциально экспрессируемых в головном мозге и яичниках костистых рыб.Дж. Стероид Биохим. Мол Биол 78: 427–439.
42. Blázquez M, Piferrer F (2004) Клонирование, анализ последовательности, распределение в тканях и специфическая для пола экспрессия нервной формы ароматазы P450 у молоди морского окуня (Dicentrarchus labrax). Mol Cell Endocrinol 219: 83–94
43. Морохаши К.И., Омура Т. (1996) Ad4BP / SF-1, фактор транскрипции, необходимый для транскрипции стероидогенных генов цитохрома P450 и для установления репродуктивной функции.FASEB J 10: 1569–1577.
44. Caron KM, Clark BJ, Ikeda Y, Parker KL (1997) Стероидогенный фактор 1 действует на всех уровнях репродуктивной оси. Стероиды 62: 53–56
45. Йошиура Й., Сентилкумаран Б., Ватанабе М., Оба Й., Кобаяши Т. и др. (2003) Синергическая экспрессия ароматазы Ad4BP / SF-1 и цитохрома P-450 (овариального типа) в яичнике нильской тилапии, Oreochromis niloticus, во время вителлогенеза предполагает транскрипционное взаимодействие. Биол Репрод 68: 1545–1553
46.Michael MD, Kilgore MW, Morohashi K, Simpson ER (1995) Ad4BP / SF-1 регулирует циклическую AMP-индуцированную транскрипцию с проксимального промотора (PII) гена ароматазы P450 (CYP19) человека в яичнике. J Biol Chem 270: 13561–13566.
47. Осима Ю., Като Т., Ван Д., Мураками Т., Мацуда Ю. и др. (2006) Активность промотора и расположение в хромосоме гена ароматазы Rana rugosa P450 (CYP19). Zool Sci 23: 79–85.
48. Fan W, Yanase T, Morinaga H, Gondo S, Okabe T. и др.(2007) Вызванная атразином экспрессия ароматазы зависит от SF-1: последствия для эндокринных нарушений в дикой природе и репродуктивных рака у людей. Environ Health Perspect 115: 720–727
49. Тонг С.К., Чанг Б. (2003) Анализ промоторов cyp19 рыбок данио. Дж. Стероид Биохим Мол Биол 86: 381–386.
50. Акацука Н., Комацузаки Э., Исикава А., Судзуки И., Ямане Н. и др. (2005) Экспрессия гена ароматазы гонад Xenopus и характеристика 5′-фланкирующей области гена ароматазы.J Steroid Biochem Mol Biol 96: 45–50
51. Гарднер Л., Андерсон Т., Плейс А.Р., Диксон Б., Элизур А. (2005) Стратегия смены пола и гены ароматазы. Дж. Стероид Биохим Мол Биол 94: 395–404
52. Ван Д.С., Кобаяши Т., Чжоу Л.Й., Пол-Прасант Б., Иджири С. и др. (2007) Foxl2 активирует транскрипцию гена ароматазы специфическим для женщин образом путем связывания с промотором, а также взаимодействия со связывающим белком Ad4 / стероидогенным фактором 1. Mol Endocrinol 21: 712-725
53.Флеминг Н.И., Знающий К.С., Лазарус К.А., Фуллер П.Дж., Симпсон Э.Р. и др. (2010) Ароматаза является прямой мишенью для FOXL2: C134W в опухолях гранулезных клеток через единственный высококонсервативный сайт связывания в промоторе, специфичном для яичников. PLoS ONE 5: e14389
54. Ван Д.С., Чжоу Л.Й., Кобаяши Т., Мацуда М., Шибата Ю. и др. (2010) Двойной секс- и Mab-3-связанный фактор-1 транскрипции репрессия транскрипции ароматазы, возможный механизм, благоприятствующий мужскому пути у тилапии. Эндокринология 151: 1331–1340
55.Лей Н., Карпова Т., Хорнбейкер К.И., Райс Д.А., Хекерт Л.Л. (2009) Отдельные транскрипционные механизмы Прямая экспрессия промотора Dmrt1 крысы в клетках Сертоли и зародышевых клетках трансгенных мышей. Биология репродукции 81: 118–125
56. Мэтсон К.К., Мерфи М.В., Сарвер А.Л., Гризволд, М.Д., Бардуэлл В.Дж. и др. (2011) DMRT1 предотвращает репрограммирование самок в послеродовых семенниках млекопитающих. Природа 476: 101–104
57. Loffler KA, Zarkower D, Koopman P (2003) Этиология яичниковой недостаточности при синдроме обратного эпикантуса блефарофимоза: FOXL2 — это консервативный ген раннего действия в развитии яичников позвоночных.Эндокринология 144: 3237–3243.
58. Yao HHC (2005) Путь к женственности: современные знания об эмбриональном развитии яичника. Mol Cell Endocrinol 230: 87–93
59. Ottolenghi C, Pelosi E, Tran J, Colombino M, Douglass E, et al .. (2007) Потеря Wnt4 и Foxl2 приводит к смене пола от женщины к мужчине, распространяющейся на половые клетки. Молекулярная генетика человека 16: 2795–2804. DOI: 10,1093 / hmg / ddm235.
60. Butler JEF, Kadonaga JT (2002) Основной промотор РНК-полимеразы II: ключевой компонент в регуляции экспрессии генов.Гены Dev 16: 2583–2592
61. Уотсон Дж. Д., Бейкер Т. А., Белл С. П., Ганн А., Левин М. и др. (2007) Молекулярная биология гена. 6-е изд. Бенджамин Каммингс. 880 с.
62. Morgan HD, Santos F, Green K, Dean W, Reik W (2005) Эпигенетическое репрограммирование у млекопитающих. Hum Mol Genet 14 Спец. № 1: R47–58
63. Рейк В., Дин В., Уолтер Дж. (2001) Эпигенетическое перепрограммирование в развитии млекопитающих. Наука 293: 1089–1093
64. Bird A (2002) Паттерны метилирования ДНК и эпигенетическая память.Гены Дев 16: 6–21
65. Hashida S, Kitamura K, Mikami T, Kishima Y (2003) Сдвиг температуры координированно изменяет активность и состояние метилирования транспозона Tam3 в Antirrhinum majus. Физиология растений 132: 1207–1216.
66. Хашида С.Н., Учияма Т., Мартин С., Кисима Ю., Сано И. и др. (2006) Температурно-зависимое изменение метилирования транспозона Antirrhinum Tam3 контролируется активностью его транспозазы. Растительная клетка 18: 104–118
67.Greenbaum E (2002) Стандартизированная серия эмбриональных стадий эмидидной черепахи Trachemys scripta. Канадский зоологический журнал 80: 1350–1370
68. Сент-Джон Дж. А., Браун Э. Л., Исберг С. Р., Майлз Л. Г., Чонг А. Ю. и др. (2012) Секвенирование трех геномов крокодилов для освещения эволюции архозавров и амниот. Геном Биол 13: 415
69. Bohm RA, Wang B, Brenner R, Atkinson NS (2000) Транскрипционный контроль экспрессии Ca (2 +) — активированного K (+) канала: идентификация второго, эволюционно консервативного нейронального промотора.J Exp Biol 203: 693–704.

Роль редуктазы и ароматазы в определении пола у красноухого ползунка (Trachemys scripta), черепахи с определением пола в зависимости от температуры

У многих черепах температура в середине инкубации определяет гонадный пол вылупившегося детеныша. У красноухой черепахи-ползунка (Trachemys scripta) температура инкубации 26 ° C дает все потомство мужского пола, тогда как температура инкубации 31 ° C дает все потомство женского пола; при промежуточных температурах (например,грамм. 29, 29,2, 29,4 градуса С) получается смешанное соотношение полов. Введение экзогенных эстрогенов преодолеет эффекты инкубационной температуры, производимой исключительно самцами, и вызовет определение пола самки, тогда как введение экзогенного дигидротестостерона (ДГТ) или тестостерона в яйца, инкубируемые при температуре, характерной только для самок, не будет иметь заметного эффекта. Введение ДГТ вызовет определение мужского пола только в том случае, если его вводят при промежуточных температурах инкубации, тогда как введение тестостерона в яйца, инкубируемые при всех промежуточных температурах, производящих самцов и ориентированных на самцов, приводит к появлению значительного числа потомков женского пола, эффект, предположительно, из-за ароматизации тестостерона. к эстрадиолу (OE2).Поскольку тестостерон служит предшественником как DHT, так и OE2, метаболизируясь соответственно редуктазой и ароматазой, было проведено три эксперимента, чтобы определить, преодолеют ли различные предполагаемые ингибиторы редуктазы и ароматазы влияние температуры инкубации. Во-первых, в то время как введение тестостерона в яйца, инкубируемые при всех промежуточных температурах, производящих самцов и ориентированных на самцов, приводило к получению самок в зависимости от дозы и температуры, значительное количество интерсексуалов появилось в результате обработки высокими дозами тестостерона яиц, инкубируемых у самок. смещенная промежуточная температура.Ингибиторы редуктазы 4MA и MK906 были способны давать потомство женского пола при введении при промежуточных температурах, но не дозозависимым образом. Введение ингибиторов ароматазы CGS16949A и CGS20267 приводило к появлению потомства мужского пола как при предвзятом для самок промежуточном уровне, так и при всех температурах продуцирования самок дозозависимым образом. Во-вторых, аналогичные результаты были получены с комбинированными дозами тестостерона и ингибиторов редуктазы или ароматазы. Комбинированная обработка яиц тестостероном и ингибитором редуктазы при предвзятых для самцов промежуточных температурах инкубации привела к появлению вылупившихся самок, тогда как комбинированная обработка яиц тестостероном и ингибитором ароматазы как при предвзятом для самок промежуточных температурах, так и при всех температурах для выращивания самок привела к появлению самцов.(АННОТАЦИЯ, ОБРЕЗАННАЯ ДО 400 СЛОВ)

A Анализ системного уровня определения пола в зависимости от температуры у красноухой черепахи Trachemys Scripta Elegans.

Аннотация

Определение пола — важнейший биологический процесс для всех животных, размножающихся половым путем. Несмотря на свою значимость, эволюция предоставила широкий спектр механизмов, с помощью которых половой фенотип определяется и разрабатывается даже у амниотных позвоночных.В наиболее распространенными системами определения пола в этой кладе являются генетические и температурные. определение зависимого пола. Эти две системы иногда согласованы в пределах большого группы видов, такие как млекопитающие, которые почти повсеместно используют XY генетические определение пола, или они могут быть гораздо более смешанными, как у рептилий, использующих генетические или системы, зависящие от температуры, и даже то и другое одновременно.Черепахи — особенно разнообразная группа в том, как они определяют пол, с множеством разных генетических и температурных основанные на описании системы. Мы исследовали природу температуры основанная на системе определения пола в Trachemys scripta elegans, чтобы установить, вел себя как система, основанная исключительно на температуре, или если какой-либо другой глобальный источник секса определение информации может быть очевидным в тепловых регионах, недостаточных для полного стимулировать мужское или женское развитие.Эти эксперименты показали, что определение пола у этого вида гораздо более сложный и рано действующий, чем считалось ранее, и что каждая гонада в человеке имеет одинаковую сексуальную судьбу, достаточно установлено, что он может сохраняться даже без дальнейшего взаимодействия между ними. Мы создали лучшую практику для сборки и аннотации de novo полных транскриптомов T.scripta RNA-seq и использовали эту технику для количественной оценки событий регуляции генов, которые происходят в термочувствительный период.

Полностью отсутствуют данные о разрешении TSD, когда яйца инкубируются в pivitol температура, при которой производится равное количество самцов и самок.У нас есть произвел набор временных данных, который позволил выяснить экспрессию гена события, которые происходят как в MPT, так и в FPT в течение термочувствительного период. Наши данные свидетельствуют о возможности раннего установления мужской или женской судьбы. когда температура достаточно высока, как при MPT и FPT. Мы видим сильную паттерн взаимно антагонистических паттернов экспрессии генов, возникающих рано и расширяющихся со временем до конца периода гонад пластичность.Кроме того, у нас есть идентифицировали сильный паттерн дифференциальной экспрессии в раннем эмбрионе на стадиях до образования гонад. Даже без известной системной сигнализации к половым гормонам, исходящим из гонад, у раннего эмбриона есть четкие мужские и женские паттерн экспрессии генов. Мы обсуждаем, как эта ранняя потенциальная маскулинизация или феминизация эмбриона может указывать на то, что влияние температуры может выходить за пределы определение пола гонад или даже метаболических изменений и то, как это затрудняет четко определенная парадигма, в которой пол гонад определяет периферические половые признаки.

Определение пола новорожденных черепах с помощью определения пола в зависимости от температуры с помощью небольших образцов крови

Булл, Дж. Дж. Определение пола в зависимости от температуры у рептилий: достоверность диагноза пола у вылупившихся ящериц. банка. J. Zool. 65 , 1421–1424 (1987).

Артикул Google ученый

Пье, К., Дорицци, М., Ричард-Мерсье, Н. Определение пола в зависимости от температуры и дифференциация гонад у рептилий. В Гены и механизмы позвоночных Определение пола (ред. Шерер, Г. и Шмид, М.), т. 91 117–141 (Birkhäuser Basel, 2001).

Миллер Дж. Д. Репродукция морских черепах. Biol. Морская Турт. 1 , 51–82 (1997).

Google ученый

Yntema, C. L. и Mrosovsky, N. Половая дифференциация вылупившихся логгерхедов (Caretta caretta), инкубированных при различных контролируемых температурах. Herpetologica 33–36 (1980).

Эверт, М. А., Эчбергер, К. Р. и Нельсон, С. Е. Режимы определения пола черепах и паттерны TSD, а также некоторые паттерны TSD коррелируют. В зависимости от температуры. Определение пола. Vertebr. Смитсон. Мытье книг DC 21–32 (2004).

Ashman, T.-L. и др. .Tree of Sex: база данных сексуальных систем. Sci. Данные 1 , 140015 (2014).

Артикул Google ученый

Эверт, М. А., Джексон, Д. Р., Нельсон, К. Э. Модели определения пола в зависимости от температуры у черепах. J. Exp. Zool. 270 , 3–15 (1994).

Артикул Google ученый

Янзен, Ф.J. Изменение климата и определение пола в зависимости от температуры у рептилий. Proc. Natl. Акад. Sci. 91 , 7487–7490 (1994).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed Google ученый

Валенсуэла, Н. и др. . Экстремальные температурные колебания, вызванные изменением климата, неожиданно ускоряют демографический коллапс позвоночных, определяющий пол в зависимости от температуры. Sci. Отчетность 9 , 4254 (2019).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

10.

Fuentes, M., Limpus, C., Hamann, M. & Dawson, J. Потенциальные воздействия прогнозируемого повышения уровня моря на лежбища морских черепах. Aquat. Консерв. Mar. Freshw. Экосист. 20 , 132–139 (2010).

Артикул Google ученый

11.

Хоукс, Л., Бродерик, А., Годфри М. и Годли Б. Изменение климата и морские черепахи. Опасность. Виды Res. 7 , 137–154 (2009).

Артикул Google ученый

12.

Дженсен М. П. и др. . Экологическое потепление и феминизация одной из крупнейших популяций морских черепах в мире. Curr. Биол. 28 , 154–159.e4 (2018).

Артикул CAS PubMed Google ученый

13.

Винекен, Дж., Эпперли, С. П., Кроудер, Л. Б., Воган, Дж. И Блэр Эспер, К. Определение пола у вылупившихся морских черепах с использованием нескольких характеристик гонад и дополнительных протоков. Herpetologica 63 , 19–30 (2007).

Артикул Google ученый

14.

Бьорндал, К. А., Парсонс, Дж., Мустин, В. и Болтен, А. Б. Порог зрелости долгоживущих рептилий: взаимодействие возраста, размера и роста. Mar. Biol. 160 , 607–616 (2013).

Артикул Google ученый

15.

Виббельс, Т., Оуэнс, Д. У. и Лимпус, К. Дж. Определение пола молодых морских черепах: есть ли точный и практичный метод? Chelonian Conserv. Биол. 3 , 756–761 (2000).

Google ученый

16.

Monsinjon, J., Guillon, J.-M., Hulin, V. & Girondot, M.Моделирование соотношения полов в естественных кладках европейской прудовой черепахи Emys orbicularis (L., 1758) по температуре воздуха. 10.

17.

Girondot, M., Ben Hassine, S., Sellos, C., Godfrey, M. & Guillon, J.-M. Моделирование теплового воздействия на рост животных и определение пола у рептилий: приближение к цели дает новые взгляды. Секс. Dev. 4 , 29–38 (2010).

Артикул CAS PubMed Google ученый

18.

Годфри М. Х., Мросовский Н. и Баррето Р. Оценка соотношения полов морских черепах в Суринаме в прошлом и настоящем. банка. J. Zool. 74 , 267–277 (1996).

Артикул Google ученый

19.

Годли Б. Дж. и др. . Температурные условия в гнездах логгерхедовых черепах: еще одно свидетельство того, что соотношение полов в продуктах вылупления самок в Средиземноморье искажено. J. Exp. Mar. Biol.Ecol. 263 , 45–63 (2001).

Артикул Google ученый

20.

Годли Б., Бродерик А. и Мросовский Н. Оценка соотношения полов у логгерхедов на Кипре по продолжительности инкубации. Mar. Ecol. Прог. Сер. 210 , 195–201 (2001).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ Google ученый

21.

Марковальди, М.А., Годфри, М.Х. и Мросовски Н. Оценка соотношения полов логгерхедовых черепах в Бразилии на основе продолжительности инкубации. банка. J. Zool. 75 , 755–770 (1997).

Артикул Google ученый

22.

Шванц, Л. Э., Спенсер, Р.-Дж., Боуден, Р. М. и Янцен, Ф. Дж. Климат и хищничество доминируют в пополнении молоди и взрослых черепах с определением пола в зависимости от температуры. Экология 91 , 3016–3026 (2010).

Артикул PubMed Google ученый

23.

Пио, С. и Мросовский, Н. Переходный диапазон температуры, основные температуры и термочувствительные стадии для определения пола у рептилий. Амфибия-Рептилия. 12 , 169–179 (1991).

Артикул Google ученый

24.

Винекен, Дж. И Лолавар, А. Определение пола морских черепах логгерхедов в окружающей среде: влияние влажности и температуры на прогнозы выживания видов на основе изменения климата: определение пола логгерхедов в окружающей среде. J. Exp. Зоолог. B Mol. Dev. Evol. 324 , 295–314 (2015).

Артикул Google ученый

25.

Интема, К. Л., Мросовский Н. Критические периоды и основные температуры для половой дифференциации у морских черепах-логгерхедов. банка. J. Zool. 60 , 1012–1016 (1982).

Артикул Google ученый

26.

Валенсуэла, Н., Адамс Д. К., Боуден Р. М. и Гогер А. С. Геометрическая морфометрическая оценка пола вылупившихся черепах: мощная альтернатива для обнаружения тонкого диморфизма половой формы. Копея 2004 , 735–742 (2004).

Артикул Google ученый

27.

Лубиана А. и Феррейра Джуниор П. Д. Основная температура и половой диморфизм вылупившихся птенцов Podocnemis expansa (Testudines: Podocnemididae) с острова Бананал, Бразилия. Zool. Куритиба 26 , 527–533 (2009).

Артикул Google ученый

28.

Ceballos, C. P. & Valenzuela, N. Роль половой пластичности в формировании полового диморфизма у долгоживущих позвоночных, щелкающих черепах Chelydra serpentina. Evol. Биол. 38 , 163 (2011).

Артикул Google ученый

29.

Себальос, К. П., Эрнандес, О. Э. и Валенсуэла, Н. Дивергентная полоспецифическая пластичность у долгоживущих позвоночных с контрастирующим половым диморфизмом. Evol. Биол. 41 , 81–98 (2014).

Артикул Google ученый

30.

Гомес-Салдарриага, К., Валенсуэла, Н. и Себальос, К. П. Влияние температуры инкубации на определение пола у находящейся под угрозой исчезновения черепахи реки Магдалена, Podocnemis lewyana. Chelonian Conserv. Биол. 15 , 43–53 (2016).

Артикул Google ученый

31.

Мросовский Н. и Прованча Дж. Соотношение полов вылупившихся морских черепах логгерхедов: данные и оценки 5-летнего исследования. банка. J. Zool. 70 , 530–538 (1992).

Артикул Google ученый

32.

Мросовский Н., Хопкинс-Мерфи С.Р. и Ричардсон, Дж. И. Соотношение полов морских черепах: сезонные изменения. Наука 225 , 739–741 (1984).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed Google ученый

33.

Yntema, C. L. Влияние температур инкубации на половую дифференциацию черепах Chelydra serpentina. J. Morphol. 150 , 453–461 (1976).

Артикул CAS PubMed Google ученый

34.

Паукстис, Г. Л., Гуцке, В. Х. Н. и Паккард, Г. С. Влияние водного потенциала субстрата и колебаний температуры на соотношение полов вылупившихся окрашенных черепах ( Chrysemys picta ). банка. J. Zool. 62 , 1491–1494 (1984).

Артикул Google ученый

35.

Iucn. Красный список МСОП 2006 г., находящихся под угрозой исчезновения. Внутр. Union Conserv. Nat. Nat. Ресурс. Сальник Switz . (2006).

36.

Шварцкопф, Л. и Брукс, Р. Дж. Определение пола у северных окрашенных черепах: эффект инкубации при постоянной и изменяющейся температуре. банка. J. Zool. 63 , 2543–2547 (1985).

Артикул Google ученый

37.

Тезак Б. М., Гатри К. и Винекен Дж. Иммуногистохимический подход к определению пола молодых морских черепах: подход IHC к определению пола черепах. Анат.Рек. 300 , 1512–1518 (2017).

Артикул CAS Google ученый

38.

Лигон, Д. Б., Бэкус, К. А., Филмор, Б. М., Томпсон, Д. М. Онтогенез гонад и морфология гениталий у молодых аллигаторных щелкающих черепах (Macrochelys Temminckii). в 2014).

39.

Xia, Z.-R., Li, P.-P., Gu, H.-X., Fong, J. J. & Zhao, E.-M. Оценка неинвазивных методов определения пола у птенцов зеленой морской черепахи (Chelonia mydas). Chelonian Conserv. Биол. 10 , 117–123 (2011).

Артикул Google ученый

40.

Гросс, Т.С., Крейн, Д.А., Бьорндал, К.А., Болтен, А.Б. и Карти, Р.Р. Определение пола у детенышей логгерхедовых черепах (Caretta caretta) с помощью анализа концентраций стероидов в хориоаллантоидной / амниотической жидкости. Gen. Comp. Эндокринол. 99 , 204–210 (1995).

Артикул CAS PubMed Google ученый

41.

Аллен, К. Д. и др. . Первая оценка соотношения полов для скопления пищи зеленых морских черепах в восточной части Тихого океана: проверка и применение тестостеронового ELISA. PLOS One 10 , e0138861 (2015).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

42.

Оуэнс, Д. У., Хендриксон, Дж. Р., Ланс, В. и Каллард, И. П. Методика определения пола неполовозрелых Chelonia mydas с помощью радиоиммуноанализа. Herpetologica 270–273 (1978).

43.

Виббельс, Т. Диагностика пола морских черепах в местах кормления. Res. Manag. Tech. Консерв. Морская Турт. IUCNSSC Mar. Turt. Спец. Группа Publ . 139–143 (1999).

44.

Rostal, D. C., Grumbles, J. S., Lance, V. A. & Spotila, J. R. Несмертельные методы определения пола для детенышей и незрелых пустынных черепах (Gopherus agassizii). Herpetol. Monogr. 8 , 83–87 (1994).

Артикул Google ученый

45.

Валенсуэла, Н. Влияние постоянной, сменной и естественной температуры на определение пола у черепах Podocnemis expansa. Экология 82 , 3010–3024 (2001).

Артикул Google ученый

46.

Ланс, В. А., Валенсуэла, Н. и фон Хильдебранд, П. Гормональный метод определения пола вылупившихся гигантских речных черепах, Podocnemis expansa: применение к исчезающим видам. J. Exp. Zool. 270 , 16А (1992).

Google ученый

47.

Мэдер, Д. Р. и Рудлофф, Э. Неотложная и неотложная помощь. в Медицина и хирургия рептилий 533–548 (Elsevier, 2006). https://doi.org/10.1016/B0-72-169327-X/50035-3.

48.

Рен Т. и Шредер А. Молекулярные механизмы определения пола у рептилий. Секс. Dev. 4 , 16–28 (2010).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

49.

Шумейкер, К. М. и Крюс, Д. Анализ скоординированной генной сети, лежащей в основе определения пола в зависимости от температуры у рептилий. Семин. Cell Dev. Биол. 20 , 293–303 (2009).

Артикул CAS PubMed Google ученый

50.

Шредер А. Л., Мецгер К. Дж., Миллер А. и Рен Т. Новый ген-кандидат для определения пола в зависимости от температуры у обыкновенных щелкающих черепах. Генетика 203 , 557–571 (2016).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

51.

Shoemaker, C., Ramsey, M., Queen, J. & Crews, D. Экспрессия Sox9, Mis и DMrt1 в гонаде видов с зависимым от температуры определением пола. Dev. Дин. 236 , 1055–1063 (2007).

Артикул CAS PubMed Google ученый

52.

Ge, C. и др. . Dmrt1 индуцирует мужской путь у видов черепах с зависимым от температуры определением пола. Разработка 144 , 2222–2233 (2017).

Артикул CAS PubMed Google ученый

53.

Sifuentes-Romero, I. et al. . РНКи-опосредованное молчание генов в культуре гонадных органов для изучения механизмов определения пола у морских черепах. Гены 4 , 293–305 (2013).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

54.

Rey, R., Lukas-Croisier, C., Lasala, C. & Bedecarrás, P. AMH / MIS: что мы уже знаем о гене, белке и его регуляции. Мол. Клетка. Эндокринол. 211 , 21–31 (2003).

Артикул CAS PubMed Google ученый

55.

Кейпел, Б.Определение пола позвоночных: эволюционная пластичность фундаментального переключателя. Нац. Преподобный Жене. 18 , 675–689 (2017).

Артикул CAS PubMed Google ученый

56.

Dorizzi, M., Mignot, T.-M., Guichard, A., Desvages, G. & Pieau, C. Участие эстрогенов в половой дифференциации гонад в зависимости от температуры у черепах. Дифференциация 47 , 9-17 (1991).

Артикул CAS Google ученый

57.

Эльф П. К. Стероидные гормоны желтка и определение пола у рептилий с TSD. Gen. Comp. Эндокринол. 132 , 349–355 (2003).

Артикул CAS PubMed Google ученый

58.

Allard, S. et al. . Молекулярные механизмы гормонально-опосредованной регрессии мюллерова протока: участие бета-катенина. Разработка 127 , 3349–3360 (2000).

CAS PubMed PubMed Central Google ученый

59.

Marca, A. L. & Volpe, A. Антимюллеров гормон (АМГ) в женской репродукции: полезно ли измерение циркулирующего АМГ? Clin. Эндокринол. (Oxf.) 64 , 603–610 (2006).

Артикул CAS Google ученый

60.

Western, P. S., Harry, J. L., Graves, J. A. M. & Sinclair, A.H. Определение пола в зависимости от температуры у американского аллигатора: экспрессия SF1, WT1 и DAX1 во время гонадогенеза. Ген 241 , 223–232 (2000).

Артикул CAS PubMed Google ученый

61.

Кикучи, К. и Хамагучи, С. Новые определяющие пол гены у рыб и эволюция половых хромосом: новые определяющие пол гены у рыб. Dev. Дин. 242 , 339–353 (2013).

Артикул CAS PubMed Google ученый

62.

Stoll, R., Rashedi, M. & Maraud, R. Гермафродитизм, индуцированный у цыплят с помощью трансплантатов яичек. Gen. Comp. Эндокринол. 41 , 66–75 (1980).

Артикул CAS PubMed Google ученый

63.

Вижье, Б. и др. . Антимюллеров гормон вызывает эндокринное изменение пола яичников плода. Proc. Natl. Акад. Sci. 86 , 3684–3688 (1989).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed Google ученый

64.

Paitz, R.T., Gould, A.C., Holgersson, M.C.N. & Bowden, R.M. Температура, фенотип и эволюция определения пола в зависимости от температуры: как естественные инкубации по сравнению с лабораторными инкубациями? Дж.Exp. Зоолог. B Mol. Dev. Evol. 314B , 86–93 (2010).

Артикул Google ученый

65.

Georges, A. Самки черепах из горячих гнезд: имеет значение продолжительность инкубации или пропорция развития при высоких температурах? Oecologia 81 , 323–328 (1989).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ PubMed Google ученый

66.

Янзен, Ф. Дж. Растительный покров позволяет прогнозировать соотношение полов вылупившихся черепах в естественных гнездах. Экология 75 , 1593–1599 (1994).

Артикул Google ученый

67.

Шванц, Л. Э. и Янцен, Ф. Дж. Изменение климата и определение пола в зависимости от температуры: может ли индивидуальная пластичность в фенологии гнездования предотвратить экстремальное соотношение полов? Physiol. Biochem. Zool. 81 , 826–834 (2008).

Артикул PubMed Google ученый

68.

Chan, E.-H. Развитие белых пятен, инкубация и успех вылупления яиц кожистой черепахи (Dermochelys coriacea) из Рантау Абанг, Малайзия. Copeia 42–47 (1989).

69.

Crews, D. et al. . Определение пола в зависимости от температуры у рептилий: приблизительные механизмы, конечные результаты и практическое применение. Dev. Genet. 15 , 297–312 (1994).

Артикул CAS PubMed Google ученый

Температура инкубации влияет на уровень половых стероидов у молодых красноухих черепах, Trachemys scripta, вид с зависимым от температуры полом у всех амниотических позвоночных

[42]. Более того, гены, явно участвующие в определении пола млекопитающих

(например,g., AMH, SF-1, WT1 и SOX9) [43–45]

также были идентифицированы и участвовали в определении пола птиц

[43, 46–48] и зависимости пола от температуры

. Прерывание

(TSD) у красноухой черепахи-ползунка [43, 49, 50]

(А. Флеминг и Д. Крюс, личное сообщение). Известно, что около

из этих генов (т.е. AMH и SF-1) регулируют

экспрессию стероидогенных ферментов во время дифференцировки гонад

у млекопитающих, а также могут регулировать это у рептилий

с TSD.В заключение, наши результаты с красноухой черепахой slid-

er показывают, что температура инкубации оказывает длительное влияние на уровни половых стероидов даже через 6 недель после завершения эмбрионального развития. Однако остается определить, является ли это изменение уровней стероидов

, связанным с температурными различиями в метаболизме, ростом

и поведением, которое было продемонстрировано у других рептилий

TSD [7–14 ] или вариации пигментации у красноухой черепахи-ползунка

[15, 33].

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим доктора Андреа Гор и трех анонимных рецензентов за полезные

комментариев к рукописи. Мы также благодарим Сару Вулли за помощь

с забором крови.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Эверт М.А., Джексон Д., Нельсон С. Модели определения пола в зависимости от температуры

у черепах. J Exp Zool 1994; 270: 3–15.

2. Ланг Дж. У., Эндрюс Х. В.. Определение пола в зависимости от температуры у

крокодилов.J Exp Zool 1994; 270: 28–44.

3. Виетс Б., Эверт Массачусетс, Talent LG, Нельсон CE. Механизм определения пола

анизмов у чешуекрылых рептилий. J Exp Zool 1994; 270: 45–56.

4. Экипаж Д. Определение пола в зависимости от температуры: взаимодействие

стероидных гормонов и температуры. Zool Sci 1996; 13: 1–13.

5. Пье С. Изменение температуры и определение пола у рептилий.

Bioessays 1996; 18: 19–26.

6. Копье В.А. Определение пола у рептилий: обновление.Am Zool 1997;

37: 504–513.

7. Gutzke WHN, Crews D. Температура эмбриона определяет половую принадлежность рептилии. Nature 1988; 332: 832–834.

8. Allsteadt J, Lang JW. Температура инкубации влияет на размер тела и запасы энергии вылупившихся аллигаторов на

. Physiol Zool 1994; 68: 76–97.

9. Рен Т., Ланг Дж. У. Фенотипическая пластичность роста у обычных

щелкающих черепах: влияние температуры инкубации, сцепления и их взаимодействия

.Am Nat 1995; 146: 726–747.

10. Tousignant A, Crews D. Температура инкубации и пол гонад af-

Рост и физиология геккона леопардового геккона (Eublepharis ma-

cularius), ящерицы, пол которой определяется в зависимости от температуры. J

Morphol 1995; 224: 1–12.

11. О’Стин С. Температура эмбриона влияет на температуру молоди

Выбор и скорость роста щелкающих черепах Chelydra serpentina. J Exp

Biol 1998; 201: 439–449.

12. Экипаж Д., Саката Дж., Рен Т. Влияние развития на интерсексуальные и

внутриполовые вариации роста и воспроизводства у ящерицы с определением пола в зависимости от температуры

. Comp Biochem Physiol C

1998; 119: 229–241.

13. Рен Т., Ланг Дж. У. Температура эмбриона и молоди независимо

влияет на рост вылупившихся черепах, Chelydra serpentina.

J Therm Biol 1999; 24: 33–41.

14. Рен Т., Ланг Дж. У.Температура и пол инкубации влияют на массу и

энергетических запасов вылупившихся черепах (Chelydra serpentina).

Ойкос 1999; 86: 311–319.

15. Этчбергер С. Р., Эверт Массачусетс, Филлипс Дж. Б., Нельсон К.Э. Экологические

и материнское влияние на эмбриональную пигментацию черепахи (Trach-

emys scripta elegans). Дж. Зоол (Лондон), 1993; 230: 529–539.

16. Crews D, Bergeron JM, Flores D, Bull JJ, Skipper JK, Tousignant A,

Wibbels T.Определение пола в зависимости от температуры у рептилий: prox-

imate механизмы, конечные результаты и практическое применение. Dev

Genet 1994; 15: 297–312.

17. Crews D, Bull JJ, Wibbels T. Эстроген и изменение пола у черепах:

дозозависимый феномен. Gen Comp Endocrinol 1991; 81: 357–

364.

18. Виббельс Т., Булл Дж. Дж., Крюс Д. Хронология и морфология определения пола в зависимости от температуры

. J Exp Zool 1991; 260: 371–381.

19. Бержерон Дж. М., Крюз Д., Маклахлан Дж. А. ПХБ как экологические экспертизы

трогенов: определение пола черепах как биомаркер загрязнения окружающей среды

. Environ Health Perspect 1994; 102: 780–781.

20. Виббелс Т., Булл Дж. Дж., Крюс Д. Синергизм между температурой и

эстрадиолом: общий путь определения пола черепах? J Exp Zool

1991; 260: 130–134.

21. Crews D, Cantu AR, Rhen T., Vohra R. Относительная эффективность

эстрона, эстрадиола-17

и эстриола в изменении пола у красноухих слайдов —

er (Trachemys scripta), черепаха с температурно-зависимым полом de-

окончание.Gen Comp Endocrinol 1996; 102: 317–326.

22. Crews D, Bergeron JM. Роль редуктазы и ароматазы в определении пола

у красноухого ползунка (Trachemys scripta), черепаха с

определением пола в зависимости от температуры. J Endocrinol 1994; 143:

279–289.

23. Виббелс Т., Крюс Д. Предполагаемый ингибитор ароматазы индуцирует определение мужского пола

у самки однополой ящерицы и у черепахи с TSD.

J Endocrinol 1994; 141: 295–299.

24. Рен Т., Эльф П.К., Фивиццани А.Дж., Ланг Дж.В. Черепахи с обратным полом и нормальные

имеют схожие профили половых стероидов. J Exp Zool 1996; 274: 221–

226.

25. SAS. Руководство пользователя JMP, версия 3.1 JMP. Кэри, Северная Каролина: Статистический

Институт систем анализа, Inc.; 1995.

26. White RB, Thomas P. Концентрации ste-

roids в теле и плазме у черепах Trachemys scripta до, во время и после периода

, чувствительного к температуре для определения пола, и после него.J Exp Zool 1992;

264: 159–166.

27. White RB, Thomas P. Надпочечниково-почечный и гонадный стероидогенез

во время половой дифференциации рептилии с температурным

определением пола. Gen Comp Endocrinol 1992; 88: 10–19.

28. White RB, Thomas P. Стимуляция стероидогенеза in vitro с помощью pi-

футериальных гормонов у черепахи (Trachemys scripta) в течение чувствительного к температуре периода для определения пола. Биол Репрод 1992; 47:

952–959.

29. Лихт П., Денвер Р.Дж., Павги С. Температурная зависимость in vitro pi-

гениталий, семенников и секреции щитовидной железы у черепах, Pseudemys scripta. Gen

Comp Endocrinol 1989; 76: 274–285.

30. Licht P, Pavgi S, Denver RJ. Роль связывания гормонов при простуде

подавление гормональной стимуляции гипофиза, щитовидной железы и семенников

черепахи. Gen Comp Endocrinol 1990; 80: 381–392.

31. Сельцер К.В., Палмер Б.Д. Подавление эстрогеном альбумина и сывороточного белка

170 кДа у черепах, Trachemys scripta.Gen Comp

Endocrinol 1995; 97: 340–352.

32. Селсер К.В., Ливитт WW. Прогестерон подавляет рецептор прогестерона re-

, но не рецептор эстрогена, в эстроген-примированном яйцеводе черепахи

(Trachemys scripta). Gen Comp Endocrinol 1991; 83: 316–323.

33. Гарцка В. Р., Купер В. Младший, Васмунд К. В., Лович Дж. Э. Мужской пол

стероиды и гормональный контроль мужского поведения ухаживания у желто-

низкобрюхая черепаха-ползун, Trachemys scripta.Comp Biochem Physiol

1991; 98A: 271–280.

34. Гиббонс Дж. У., Семлич Р. Д., Грин Дж. Л., Шубауэр Дж. П.. Вариация

размера и возраста половозрелой черепахи-ползунка (Pseudemys scripta). Am

Nat 1981; 117: 841–845.

35. vom Saal FS, Bronson F. Половые характеристики взрослых самок мышей

коррелируют с их уровнями тестостерона в крови во время пренатального развития. Science 1980; 208: 597–599.

36. Даже MD, Dhar MG, vom Saal FS.Транспортировка стероидов между

плодами через амниотическую жидкость в зависимости от внутриутробного положения phe-

по номену крысы. J Reprod Fertil 1992; 96: 709–716.

37. Nonneman DJ, Ganjam VK, Welshons WV, vom Saal FS. Внутриутробное влияние положения

на метаболизм стероидов и стероидные рецепторы репродуктивных органов мышей-самцов. Биол Репрод 1992; 47: 723–729.

38. van der Hoeven TH, Lefevre R, Mankes R. Влияние внутриутробного положения

на микросомальную полисубстрат-монооксигеназу печени и активность цитозольной глутатион-s-трансферазы

, половые стероиды в плазме крови и относительную массу органов

у взрослых мужчин и самки крыс Long-Evans.J

Pharmacol Exp Ther 1992; 263: 32–39.

39. Palanza P, Parmigiani S, vom Saal FS. Маркировка мочи и агрессия матери

диких самок мышей по отношению к аногенитальному расстоянию при рождении

. Physiol Behav 1995; 58: 827–835.

40. Кларк М.М., Вонк Дж. М., Галеф Б.Г. Репродуктивные профили взрослых мон-

голийских песчанок, вынашиваемых единственным плодом в роге матки. Physiol

Behav 1997; 61: 77–81.

41. Кук GM, Price CA, Oko RJ.Влияние внутриутробного и лактационного

воздействия 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина TCDD на сыворотку крови и

Исследования UAB исследуют определение пола черепах в зависимости от температуры — Новости

Дорожная карта генов ранней дифференциации указывает на ключевую роль dmrt1 в том, как температура инкубации яиц определяет пол вылупившегося детеныша.

Красноухая черепаха. Фото Nightryder84. Тейн Виббельс, доктор философии, профессор биологии Университета Алабамы в Бирмингемском колледже искусств и наук, раньше выходил на природу, чтобы ловить черепах.

Он боролся с 900 крупными морскими черепахами «в стиле родео», когда он был докторантом, проводя исследования на Большом Барьерном рифе Австралии, прыгая на спине, чтобы загнать их в загон и взять образцы крови для измерения гормонов. В Техасском университете он исследовал гнезда черепах на заводе по очистке воды в Остине и откопал яйца.

Но красноухие черепахи-ползунки, которых изучают Виббельс и бывшая докторантка UAB Кайла Бизер, имеют более легкий источник.

«Я езжу на ферму Kliebert’s Turtle and Alligator Farm в Хаммонде, штат Луизиана, по крайней мере, пять раз в год», — сказал Виббельс.«Я собираю около 1000 яиц за раз».

Эти черепахи — модель, которая пытается ответить на ключевой вопрос: как температура определяет, превратится ли эмбрион черепахи в самца или самку? У людей наши хромосомы — особенно хромосомы X и Y — определяют, получит ли ребенок розовую или синюю ленту. Но если вы возьмете яйца с красноухими ползунками и инкубируете их при температуре 78,8 градуса по Фаренгейту, все вылупившиеся птенцы будут самцами. Если бы вы инкубировали те же яйца при температуре 87,8 градуса по Фаренгейту, все птенцы были бы самками.Промежуточная температура дает смесь мужских и женских особей.

Исследователи называют это «определение пола в зависимости от температуры». Это черта рептилий, и, вероятно, она восходит к существам, похожим на рептилий, которые были предками всех современных рептилий, а также предками всех видов птиц и млекопитающих в современном мире, как минимум 220 миллионов лет назад. Тем не менее, контроль температуры пола вылупившихся птенцов до сих пор остается загадкой.

Исследователи называют это «определением пола в зависимости от температуры».Это черта рептилий, и, вероятно, она восходит к существам, похожим на рептилий, которые были предками всех современных рептилий, а также предками всех видов птиц и млекопитающих в современном мире, по крайней мере 220 миллионов лет назад. Тем не менее, контроль температуры пола вылупившихся птенцов до сих пор остается загадкой.

В статье в журнале Sexual Development, опубликованной в Интернете в ноябре и в печати в этом месяце, Бизер и Виббельс исследовали гены, определяющие пол / дифференциацию в красноухих ползунках, в период, когда эмбриональная ткань гонад превращается в оба семенника (мужские половые железы). ) или яичники (женские).Гены, которые они исследовали, представляют собой тщательно консервативные гены, которые также активны во время эмбрионального развития птиц, млекопитающих и других рептилий.

Бизер, ныне доцент кафедры биологии в Northland College в Эшленде, штат Висконсин, измерил уровни экспрессии пяти ключевых генов в яйцах черепах, инкубированных при температуре самцов или самок. Она проверила их от стадии 15 до стадии 21 эмбрионального развития, критического периода, когда температура может влиять на пол красноухого ползунка.Она обнаружила, что ген dmrt1 был самым ранним геном, который показал специфичную для пола экспрессию у мужчин, и она измерила другие гены, которые были активированы, и когда они были активированы.